per
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایران
بیماریهای گیاهی
0006-2774
2783-5189
2013-12-01
49
4
365
374
15437
Research Article
برهمکنش درونزیوهای Verticillium dahliae، عامل پژمردگی ورتیسیلیومی پسته با Acremonium kiliense
In vivo INTERACTION OF Verticillium dahliae, THE CAUSAL AGENT OF PISTACHIO VERTICILLIUM WILT, WITH Acremonium kiliense*
زهره نسیمی
z.nasimi@gmail.com
1
ضیاالدین بنیهاشمی
zia1937@gmail.com
2
رضا مستوفیزاده قلمفرسا
rmostofi@shirazu.ac.ir
3
مسئول مکاتبه
نویسنده
نویسنده
مطالعه حاضر برای دستیابی به شیوهای سازگار با محیط زیست برای مدیریت این بیماری انجام گرفت. به منظور مطالعه برهمکنشِ Verticillium dahliae عامل پژمردگی آوندی پسته وAcremonium kiliense ، قارچ درونرُست جدا شده از پسته، از نهالهای نه ماهه سه رقمِ پسته سرخس، بادامی ریز زرند و قزوینی استفاده شد. مایهزنی A. kiliense به ارقام مذکور توسط سوسپانسیون کنیدیومها به غلظتِ 106 کنیدیوم در میلیلیتر با روش غوطهوری ریشه صورت گرفت. گیاهان مایهزنی شده به گلدانهای کوچک حاوی خاک سترون انتقال داده شده، پس از یک ماه نهالها به گلدانهای حاوی 40 میکرواسکلروت ورتیسیلیوم در گرم خاک منتقل شدند. نتایج این آزمایش با استفاده از آزمایش فاکتوریل با در نظر گرفتن دو فاکتورِ رقم و تیمار قارچی به ترتیب با سه و چهار سطح و سه تکرار برای هر ترکیب، در قالب یک طرح کاملاً تصادفی مورد واکاوی آماری قرار گرفت. نتایج حاصل نشان داد در شرایط آزمایشگاه A. kiliense فاقد اثر بازدارندگی روی V. dahliae است، اما در تیمارهایی که با A. kiliense و V. dahliae مایهزنی شده بودند در مقایسه با تیمارهایی که با V. dahliae به تنهایی مایهزنی شده بودند، میزان وزن خشک ریشه و وزن خشک شاخساره افزایش یافت. برهمکنشA. kiliense -V. dahliae سبب کاهش درصد آلودگی شاخساره و ریشه نسبت به تیمارِ V. dahliae به تنهایی شد. درصد جداسازی V. dahliae از تیمارهای مختلف نشان داد، در ارقامی که با A. kiliense و V. dahliae مایهزنی شده بودند، درصد جداسازی V. dahliae در مقایسه با ارقامی که با V. dahliae به تنهایی مایهزنی شده بود کاهش داشته است. نتایج حاصل از گروهبندی آماری تیمارهای قارچی در مورد وزن خشک شاخساره بیانگر این بود که ارقام مایهزنی شده با A. kiliense، A. kiliense همراه با V. dahliae و نمونه شاهد در یک گروه قرار میگیرند، در حالی که ارقام مایهزنی شده با V. dahliae در گروهی مجزا قرار میگیرند. نتایج حاصل از جداسازی ورتیسیلیوم از بافتها نشان داد که در تمام ارقام، میزان جداسازی V. dahliae در تیمار برهمکنش A. kiliense - V. dahliae نسبت به تیمار V. dahliae به تنهایی بیش از 50 درصد کاهش مییابد
This study was conducted on the interaction between Verticillium dahliae, the causal agent of vascular wilt of pistachio trees, and Acremonium kiliense, an endophyte fungus with biological control effects. Nine-month-old seedlings of three pistachio cultivars including Sarakhs, Badami-Rize-Zarand and Ghazvini were used by root dip method in conidial suspension (106 ml-1) and transferred to pots containing autoclaved soil. After one month, the inoculated seedlings were transferred to soil containing 40 microsclerotia/g soil of V. dahliae. The trial was performed as a two-factor factorial experiment with 3 replications for each combination, the factors being cultivars and fungal treatments at 3 and 4 levels, respectively, in a completely randomized design. The results showed an increase in the dry weight of roots and shoots in trees inoculated with A. kiliense plus V. dahliae compared to trees inoculated only with V. dahliae. Interaction of A. kiliense and V. dahliae decreased the percentage of shoots and roots infection compare to treatments of V. dahliae alone. The percentage of V. dahliae isolation from different treatments showed that cultivars inoculated with A. kiliense plus V. dahliae had a lower colonization by V. dahliae than those inoculated only with V. dahliae. The results of statistical grouping revealed that shoot dry weight in all inoculated cultivars with A. kiliense, A. kiliense plus V. dahliae, and control belonged to one group, whereas cultivars inoculated only with V. dahliae constituted a separate group. The results of the Verticillium isolation from tissue showed that the isolation rate of V. dahliae in interaction between A. kiliense-V.dahliae, compared to V. dahliae alone, decreased more than 50 percent in all cultivars.
https://ijpp.areeo.ac.ir/article_15437_f428ce02be28197f24ea54d51c9c1fef.pdf
پژمردگی ورتیسیلیومی پسته
Verticillium dahliae
Acremonium kiliense
per
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایران
بیماریهای گیاهی
0006-2774
2783-5189
2013-12-01
49
4
375
388
15457
Research Article
ترادف نوکلئوتیدی ژنوم کامل و جایگاه تاکسونومیکی جدایههای جو و گندم سویه گندم ویروس کوتولگی گندم در ایران
THE NUCLEOTIDE SEQUENCE OF COMPLETE GENOME AND TAXONOMIC POSITION OF WHEAT AND BARLEY ISOLATES OF WHEAT STRAIN OF WHEAT DWARF VIRUS IN IRAN
مائده لطفی پور
1
محمدهادی عمید مطلق
2
علیرضا افشاریفر
alirezaafsharifar@yahoo.com
3
سید علی اکبر بهجت نیا
akbar_behjatnia@hotmail.com
4
کرامتاله ایزدپناه
5
نویسنده
نویسنده
مسئول مکاتبه
نویسنده
نویسنده
ویروس کوتولگی گندم ((WDV از عوامل اصلی ایجادکننده بیماریهای کوتولگی و زردی غلات است. دو سویه جو (WDV-B) و گندم (WDV-W) از این ویروس از مزارع گندم و جو مناطق مختلف ایران گزارش شدهاند. مطالعه پراکنش سویههای WDV در مزارع غلات ایران نشان داده است که WDV-W از گسترش بیشتری نسبت به WDV-B برخوردار است. بیش از این ترادف نوکلئوتیدی ژنوم کامل یک جدایه از WDV-B از استان خراسان (WDV-Bar[IR:Bar]) تعیین شده است. برای مشخص شدن وضعیت تاکسونومیکی جدایههای گندم و جو WDV-W در ایران، ژنوم کامل یک جدایه گندم WDV-W از شهرکرد استان چهارمحال و بختیاری ( WDV-Whe[Iran:Sh:Whe]) و یک جدایه جو از همین سویه از منطقه بوانات استان فارس (WDV-Whe [Iran:Ba:Bar] ) به ترتیب شامل 2750 و 2749 نوکلئوتید تعیین ترادف شدند. دندروگرام حاصل از مطالعات تبارزایی تقسیم بندی سویههای WDV را به دو گروه WDV-W و WDV-B تأئید نمود به طوری که WDV-Whe[Iran:Sh:Whe] وWDV-Whe[Iran:Ba:Bar] در گروه WDV-W و WDV-Bar[IR:Bar] همراه با سایر جدایههای WDV-B در گروه دیگر قرار گرفتند. نتایج حاصل از ترادف نوکلئوتیدی در قسمتهای مختلف ژنوم نیز نشان داد که دو جدایه WDV-W مورد مطالعه با یکدیگر و با جدایههای سویه گندم موجود در بانک ژن بیشترین شباهت را در ناحیه پروتئین همراه با همانندسازی و کمترین شباهت را در ناحیه پروتئین حرکتی و ناحیه بین ژنی بزرگ دارند
Wheat dwarf virus (WDV) is one of the main factors causing stunting and yellowing diseases of cereals. Two strains of WDV have been reported from different parts of Iran. The barley strain (WDV-B) is only detected from naturally infected barley plants, while the wheat strain (WDV-W) infects both wheat and barley plants. Previous results regarding distribution of WDV strains have revealed the dominance of WDV-W compared to WDV-B in cereal fields of Iran. To investigate the taxonomic position of the Iranian WDV strains, the complete DNA genome of a wheat isolate of WDV-W from Shahrekord (WDV-Whe[Iran:Sh:Whe]) and of a barley isolate of WDV-W from Bavanat (WDV-Whe[Iran:Ba:Bar], with 2750 and 2749 nucleotides, respectively, were sequenced. Phylogenetic analysis of nucleotide sequences of the genome, revealed two main clusters designated WDV- W and WDV-B. Cluster WDV-W is composed of two Iranian isolates including WDV-Whe[Iran:Sh:Whe], WDV-Whe[Iran:Ba:Bar] and nine non-Iranian wheat isolates of WDW (WDV-W). An Iranian barley isolate of WDV (WDV-Bar[IR:Bar]) and seven exotic barley isolates of WDV formed the second cluster (WDV-B). Sequence comparison of different genomic regions of the two Iranian WDV-W isolates showed that the replication-associated protein was the most conserved while the movement protein and the large intergenic region were the most divergent regions.
https://ijpp.areeo.ac.ir/article_15457_5f75f60e640b6b001f96d9813a4fa100.pdf
جمینی ویروس
جو
گندم
ماستری ویروس
ویروس کوتولگی گندم
barley
Geminivirus
Mastrevirus
Wheat
Wheat dwarf virus
per
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایران
بیماریهای گیاهی
0006-2774
2783-5189
2013-12-01
49
4
389
401
15464
Research Article
معرفی چند گونه نماتود از فوقبالاخانواده Tylenchomorpha از استان قم
NEMATODE SPECIES OF THE INFRAORDER TYLENCHOMORPHA FROM QOM PROVINCE, IRAN
ذوالفقار لطفی
1
آزاده قره خانی
2
نویسنده
مسئول مکاتبه
به منظور شناسایی نماتودهای باغها و مزارع مناطق کهک و مرکزی استان قم، طی بهار و پاییز سال 1389 تعداد 50 نمونه خاک و ریشه از مزارع و باغات استان جمعآوری و نماتودها با استفاده از الکهای خاکشویی و روش سانتریفوژ استخراج و پس از کشتن و تثبیت، اسلایدهای میکروسکوپی دائمی تهیه گردید. خصوصیات مرفولوژیک و مرفومتریک مهم نماتودها با استفاده از میکروسکوپ نوری مجهز به لوله ترسیم مورد بررسی قرار گرفت. در این بررسی تعداد 16 گونه از 12 جنس در فوق بالاخانواده Tylenchomorpha و زیرراسته Tylenchina شناسایی شد، که از بین آنها گونههای Aphelenchoides singhi ، Prothallonema macrocellumبرای اولین بار از ایران از خاک اطراف ریشه گیلاس و جو شرح داده میشود، همچنین گونهBoleodorus voloutus Lim & Siddiqi, 1963 نیز از خاک اطراف ریشه آلوچه مجدداً از ایران شرح داده می شود. گونه A. singhiبا توجه به وجود چهار شیار در سطوح جانبی، فرورفتگی محل تماس سر با بدن، طول استایلت و وجود گره انتهایی و گونه P. macrocellum براساس شش شیار بودن باند جانبی، عدم وجود ماکرون در انتهای دم و همچنین نسبت طول دم به فاصله فرج- مخرج تشخیص داده شد. همچنین گونه B. voloutus با داشتن بدن مارپیچی بعد از تثبیت، سر گرد و متمایز از بدن، شکاف آمفیدی اریب و بزرگ، موقعیت عقبی فرج، استایلت کوتاه و دم عصایی شکل با انتهای گرد و بدون شیار تشخیص داده شدند.
In order to identify nematodes associated with orchards and fields of Kahak and Markazi regions in Qom Province, 50 soil and root samples were collected from different localities, during spring and autumn of 2010. The samples were washed and nematodes were extracted by centrifugal floatation technique. They were fixed and transferred to glycerin according to the de Grisse method (1969). Permanent slides were prepared from the extracted nematodes and some cross sections were made from different parts of the body. Morphological and morphometrical characters specimens were studied by light microscope attached to drawing tube. In result 16 species belonging to 12 genera of Tylenchina were identified. From these species Aphelenchoides singhi, Boleodorus volutus and Prothallonema macrocellum are reported and described for the first time from Iran and Aphelenchoides singhi is reported for the second time in the world..
https://ijpp.areeo.ac.ir/article_15464_50db8ae33bb9c4fa00a5cd0f5263c78e.pdf
شناسایی
مورفولوژی
نماتود
Aphelenchoides
Boleodorus
Prothallonema
Tylenchina
Aphelenchoides
Boleodorus
identification
Morphology
Nematode
Prothallonema
Tylenchina
per
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایران
بیماریهای گیاهی
0006-2774
2783-5189
2013-12-01
49
4
403
409
15465
Research Article
ساخت سازه عفونتزا و اثبات بیماریزایی ژنوم دو بخشی ویروس پالامپور پیچیدگی برگ گوجه فرنگی- جدایه ایران
CONSTRUCTION AND DEMONSTRATION OF INFECTIVITY OF THE INFECTIOUS CLONE OF THE BIPARTITE GENOME OF TOMATO LEAF CURL PALAMPUR VIRUS-IRANIAN ISOLATE
مریم صبوری
1
جهانگیر حیدرنژاد
jheydarnejad@mail.uk.ac.ir
2
نویسنده
مسئول مکاتبه
به منظور اثبات بیماریزایی و تعیین میزبانهای آزمایشگاهی جدایه ایرانی ویروس پالامپور پیچیدگی برگ گوجهفرنگی (Tomato leaf curl Palampur virus-IR, ToLCPMV-IR)، سازههای دوپار بهطور مستقل برای هر کدام از قطعات ژنومی A و B ویروس، طراحی و داخل ناقل دوگانه pGreen0029 قرار داده شد. هر دو بهطور جداگانه به همراه پلاسمید کمکی pSoup به سلولهای باکتری Agrobacterium tumefaciens نژاد C58 منتقل و به چند میزبان آزمایشگاهی مایهزنی گردیدند. نتایج بهدست آمده نشان داد که سازه ساخته شده با راندمان بالائی قادر به ایجاد بیماری در خیار، کدو، گوجه فرنگی و سه گونه توتون است ولی هندوانه توسط آن آلوده نمیشود. آلودگی ایجاد شده از طریق سازه عفونتزا، توسط سفید بالک (Bemisia tabaci) به گیاهچههای سالم کدو منتقل شد. بر اساس نتایج بهدست آمده، ضمن اثبات قابلیت بیماریزایی ژنوم دو بخشی، مشخص شد که خیار گلخانهای یکی از حساسترین میزبانهای آزمایشگاهی ToLCPMV-IR است. سازه ساخته شده میتواند در مطالعاتی مانند بررسی عکسالعمل ارقام گیاهان میزبان در برابر ویروس و تعیین وظایف ژنها استفاده میشود.
Among begomoviruses infecting tomato, Tomato leaf curl Palampur virus-IR (ToLCPMV-IR) is the first bipartite begomovirus reported in Iran. To demonstrate infectivity of the bipartite genome and identify the experimental host range of the ToLCPMV-IR, dimer construct for each genomic component A and B was designed and constructed. The resulting clones were separately ligated to binary vector pGreen0029 and used simultaneously with pSoup (helper plasmid) to transform Agrobacterium tumefaciens strain C58. Agroinoculation with the cloned DNA of the ToLCPMV-IR genome resulted in the efficient infection of several experimental hosts such as cucumber, squash, tomato and three tobacco species but not watermelon. The virus was transmitted from agroinoculated plants to healthy squash seedlings by whitefly Bemisia tabaci, the natural vector of ToLCPMV-IR. Based on the results of this study, we demonstrate infectivity of the bipartite cloned genome of ToLCPMV-IR. The constructed infectious clone can be used for evaluation of the reaction of host plant cultivars and analysis the genes function.
https://ijpp.areeo.ac.ir/article_15465_26eb21f3900a4acc7e0b5b3f799628b9.pdf
جمینی ویروس
بگوموویروس
ویروس پالامپور پیچیدگی برگ گوجه فرنگی
سازه عفونتزا
خیار
Geminivirus
Begomovirus
Tomato leaf curl Palampur virus
infectious clone
Cucumber
per
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایران
بیماریهای گیاهی
0006-2774
2783-5189
2013-12-01
49
4
410
411
15467
Research Article
تشخیص Phaeoacremonium tuscanum و گونههای Botryosphaeriaceae همراه با بیماری زوال انگور در ایران و بررسی نقش بقایای هرس شده در ماندگاری عوامل بیمارگر
DETECTION OF Phaeoacremonium tuscanum AND BOTRYOSPHAERIACEAE SPECIES ASSOCIATED WITH GRAPEVINE DECLINE IN IRAN AND THE POTENTIAL ROLE OF PRUNING DEBRIS ON THE SURVIVAL OF THE PATHOGENS
مریم عرب نژاد
1
حمید محمدی
hmho279@yahoo.com
2
نویسنده
مسئول مکاتبه
در بهار و تابستان سالهای 1388 و 1391 و به منظور جداسازی و شناسایی قارچهای همراه با زوال انگور در استانهای کرمان ( جنوب شرق ایران) و کهگیلویه و بویر احمد ( جنوب غرب ایران) از باغ های مختلف بازدید به عمل آمد. از درختان انگور با علائم بیماری شامل زردی، کم برگی، کاهش رشد، پژمردگی، زردی بین رگبرگی، علائم داخلی مانند وجود لکههای سیاهرنگ و تغییر رنگ بافت چوب در برش عرضی و همچنین بقایای هرس شده چوب انگور در کف باغها نمونهبرداری شد. جداسازی عوامل قارچی از بافتهای تغییر رنگ یافته چوب و پیکنیدیومهای تشکیل شده روی بقایای هرس شده با به کارگیری محیط کشتهای عصاره مالت – آگار حاوی یک میلیگرم در میلیلیتر سولفات استرپتومیسن (MEAS) و عصاره سیب زمینی–آگار (PDA) انجام گردید. بر اساس ویژگیهای ریخت شناختی و مولکولی چهار گونه Phaeoacremonium tuscanum، Diplodia seriata، Botryosphaeria dothidea وNeofusicoccum parvum از نمونههای جمعآوری شده جداسازی و شناسایی شد. در این خصوص، دو گونه D. seriata و B. dothidea از درختان بیمار و پیکنیدیومهای تشکیل شده روی بقایای هرس شده جداسازی گردیدند در حالیکه گونه N. parvum تنها از پیکنیدیومهای موجود روی بقایای هرس شده به دست آمد. گونه Pm. tuscanum از درختان انگور با علائم زردی، برگریزی، کوتولگی برگها و وجود لکهها و رگههای سیاه رنگ در برش عرضی از شاخههای آلوده جداسازی شدند. آزمون بیماریزایی روی شاخههای سبز رقم عسکری و تحت شرایط گلخانهای انجام شد. براساس نتایج بهدست آمده از آزمون بیماریزایی، همه گونههای مورد استفاده بیماریزا بودند و بعد از گذشت25 روز باعث تغییر رنگ بافت چوب در قلمههای مایهزنی شده گردیدند. جهت اثبات آزمون کخ قارچهای مایهزنی شده مجدداً از حاشیه بافت آلوده و سالم جداسازی و شناسایی شدند. بر اساس اطلاعات موجود این اولین گزارش از Pm. tuscanum همراه با زوال انگور در ایران است. همچنین این مطالعه اولین گزارش از وجود سه گونه D. seriata، N. parvum و B. dothidea روی بقایای هرس شده چوب در باغهای انگور در این کشور است.
During spring and summer of 2010 and 2012, several surveys were conducted in different vineyards in Kohgiluyeh & Boyer-ahmad (southwestern Iran) and Kerman (southeastern Iran) provinces, with the aim of isolating and identifying fungi associated with grapevine decline diseases. The samples collected comprised diseased grapevines showing yellowing, defoliation, reduced growth, wilting, interveinal chlorosis, internal black spots and wood discoloration in cross section, as well as woody vine debristaken from the vineyards floor. Isolations were made from symptomatic wood tissues and pycnidia on the bark of pruning debris on malt extract agar supplemented with 1 mg ml-1 streptomycin sulphate (MEAS) and potato dextrose agar (PDA) media. Based on morphological and molecular characteristics four species: Phaeoacremonium tuscanum, Diplodia seriata, Botryosphaeria dothidea and Neofusicoccum parvum were isolated and identified from samples collected. In this regards, D. seriata and B. dothidea were recovered from diseased grapevines and pruning debris while N. parvum was obtained only from pycnidia formed on the bark of grapevine pruning debris. Pm. tuscanum was isolated from grapevines showing yellowing, defoliation, small chlorotic leaves, internal black spots and brown to black streaking in cross section. Pathogenicity tests were conducted on green shoot cuttings of 'Askari' cultivar under greenhouse conditions. Based on the results of pathogenicity tests, all tested species were pathogenic and caused significant wood discoloration on inoculated cuttings 25 days after inoculation. The fungi were re-isolated from the margin of the lesions, completing Koch’s postulates. Based on our knowledge, this is the first report of Pm. tuscanum from grapevine in Iran. This is also the first report of D. seriata, N. parvum and B. dothidea from pruning debris on the vineyard floors in this country.
https://ijpp.areeo.ac.ir/article_15467_b1da6ca78ae10319e79d9e0829bde87c.pdf
β-tubulin
Grapevine trunk diseases
Internal transcribed spacers
Vitis vinifera
per
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایران
بیماریهای گیاهی
0006-2774
2783-5189
2013-12-01
49
4
413
424
15468
Research Article
ارزیابی مقاومت 20 ژرمپلاسم کنجد نسبت به بوتهمیری فوزاریومی با عامل Fusarium oxysporum f.sp. sesami در استان یزد و بررسی فعالیت آنزیم فنیل آلانین آمونیالیاز((PAL در ژرمپلاسم های مقاوم و حساس به این بیماری
EVALUATION OF RESISTANCE OF 20 SESAME GERMPLASMS TO DAMPING-OFF CAUSED BY Fusarium oxysporum F.SP. Sesami IN YAZD REGION AND INVESTIGATION OF PHENYLALANINE AMMONIALYASE (PAL) ACTIVITY IN RESISTANT AND SUSCEPTIBLE GERMPLASMS
اعظم فلاح پوری
1
حشمت الله امینیان
2
نوازالله صاحبانی
3
سید علیرضا اسمعیل زاده حسینی
phytoplasma.iran@gmail.com
4
مسئول مکاتبه
نویسنده
نویسنده
نویسنده
بوتهمیری فوزاریومی با عامل Fusarium oxysporum f.sp. sesami یکی از مهمترین بیماریهای کنجد، در تمام نواحی کشت این گیاه در دنیا میباشد .در این تحقیق میزان مقاومت نسبی 20 ژرمپلاسم کنجد نسبت به عامل بیماری بوتهمیری فوزاریومی در شرایط گلخانه بررسی شد .15 جدایه Fusarium oxysporum از سطح مزارع کنجد استان یزد جداسازی و خالصسازی شد و از این میان جدایهای که دارای بالاترین سطح بیماریزایی بود انتخاب شد و در آزمون تعیین دامنه میزبانی جدایه مربوطه، Fusarium oxysporum f.sp. sesami تشخیص داده شد. در آزمایش ارزیابی مقاومت ارقام مختلف کنجد در شرایط گلخانه نسبت به این بیماری، 20 ژرمپلاسم کنجد بر اساس شاخص شدت آلودگی (2-0) و درصد آلودگی بوتهها (5-1) مورد ارزیابی قرار گرفتند. آنالیز آماری دادهها نشان داد، از نظر میزان مقاومت به عامل بیماری، بین ژرمپلاسم های مورد بررسی اختلاف معنیداری در سطح یک درصد وجود داشت. با استفاده از نتایج این مرحله، توده محلی آسفیج بهاباد به عنوان مقاومترین ژرمپلاسم و توده محلی کهنوج به عنوان حساسترین ژرمپلاسم به این بیماری شناسایی شد. سپس، فعالیت آنزیم فنیل آلانین آمونیا لیاز (PAL) در ژرمپلاسمهای مقاوم و حساس در روزهای 2، 4، 6، 8، 10 و 12 روز پس از مایهزنی با قارچ عامل بیماری اندازهگیری شد. فعالیت آنزیم PAL در ژرمپلاسم مقاوم پس از مایهزنی با قارچ به سرعت افزایش و در روز چهارم به اوج خود رسید و سپس کاهش و دوباره در روز دوازدهم افزایش یافت اما این میزان افزایش نسبت به روز چهارم کمتر بود. در رقم حساس، افزایش فعالیت آنزیم با سرعت و به میزان کمتری رخ داد. تحقیق حاضر نشان داد که افزایش فعالیت PAL میتواند نقش احتمالی در القای مقاومت در گیاهان داشته باشد.
Fusarium damping off caused by Fusarium oxysporum f.sp. sesami is one of the most important diseases of sesame, in all areas of sesame production in the world. In this investigation, resistance of 20 sesame germplasms to Fusarium damping off was assayed in greenhouse. Fifteen isolates of the causal agent were isolated from sesame in Yazd region and one isolate with the highest pathogenicity potential selected. Special test showed that the isolate was Fusarium oxysporum f.sp. sesami (FOS). Twenty sesame germplasms were assayed by disease severity index (0-2) and infection percent index (1-5) for their reaction to FOS. Statistical analysis of data showed that there was a considerable difference at about 1% level among the investigated germplasms from the perspective of resistance to disorder facror. By using the achieved findings determined that local Asfige Bahabad germplasm as resistant germplasm and local Kahnouj germplasm as susceptible germplasm. In the next step of study, PAL activity was assayed in resistant and susceptible germplasms 2, 4, 6, 8, 10 and 12 days after inoculation.PAL enzyme activity in resistant germplasm increased rapidly and reached it’s acme in the 4th day after inoculation and then decreased, increased to 12th day again. But this amount was lower as 4th day. In susceptible germplasm PAL activity increased slowly. This investigation showed that the increase of PAL activity can have probable role in the induction of resistance.
https://ijpp.areeo.ac.ir/article_15468_d8dc593c1f32b28cb390bcfe5942ce3d.pdf
Germplasm
بوتهمیری فوزاریومی کنجد
شدت آلودگی
درصد آلودگی
آنزیم PAL
Fusarium oxysporum f.sp. sesami
Sesame germplsms
Sesame Fusarium damping off
Diseases severity
Infection percent
PAL enzyme
Fusarium oxysporum f.sp. sesami
per
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایران
بیماریهای گیاهی
0006-2774
2783-5189
2013-12-01
49
4
439
446
15470
Research Article
اطلاعات جدید از قارچهای سرکوسپوروئید در ایران
CONTRIBUTION TO THE KNOWLEDGE OF CERCOSPOROID FUNGI IN IRAN
قارچهای سرکوسپوروئید شامل جنس Cercospora و سایر جنسهای با خصوصیات ریختشناسی مشابه، از بیمارگرهای مهم مولد لکهبرگی روی دامنه وسیعی از میزبانهای گیاهی هستند. به منظور مطالعه تاکسونومی قارچهای سرکوسپوروئید، نمونهها از مناطق مختلف استان مازندران و از میزبانهای مختلف دارای علائم لکهبرگی در فصول بهار تا پاییز سالهای 91-1390 جمعآوری شدند. آرایههای Cercospora hostae(روی Hosta albomarginata)، Pseudocercospora cydoniae (روی Chaenomeles japonica) و Stigmina palmivora (روی Washingtonia robustaو Phoenix canariensis) برای اولین بار از ایران گزارش میشوند. گیاه Hibiscus syriacus به عنوان میزبان جدید برای Cercospora althaeina در دنیا میباشد. علاوه بر این، گونه Cercospora apii s. lat. روی 13 میزبان گیاهی شناسایی شد که روی 6 میزبان برای اولینبار در دنیا معرفی میگردد و 5 میزبان به عنوان میزبانهای جدید در ایران هستند.
Cercosporoid fungi including the genus Cercospora and other morphologically similar genera are important pathogens causing leaf spots on a wide range of host plants. In a taxonomic study on cercosporoid fungi, plants with leaf spot symptoms from different localities of Mazandaran province were collected and examined during spring-autumn 2011-12. As the result, Cercospora hostae (on Hosta albomarginata), Pseudocercospora cydoniae (on Chaenomeles japonica)and Stigmina palmivora (on Washingtonia robusta and Phoenix canariensis) are reported here as new records for Iran. Hibiscus syriacus is a new host for Cercospora althaeina. Furthermore, Cercospora apii s. lat. is identified on 13 host plants including 6 new hosts in the world and 5 new hosts in Iran.
https://ijpp.areeo.ac.ir/article_15470_b60bc9c003bbbd8c518dba0846e4b462.pdf
قارچهای آنامورفیک
تنوع زیستی
لکهبرگی
تاکسونومی
Anamorphic fungi
Biodiversity
Leaf spot
Fungal taxonomy
per
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایران
بیماریهای گیاهی
0006-2774
2783-5189
2013-12-01
49
4
447
451
15493
Short Article
بررسی مولکولی جدایههای Absidiaبر اساس ناحیهrDNA-ITS
MOLECULAR ANALYSIS OF Absidia ISOLATES BASED
ON rDNA-ITS REGION
زهرا ده بوید
1
محمدعلی تاجیک قنبری
m.tajick@gmail.com
2
حشمتاله رحیمیان
3
مهدی ارزنلو
arzanlou@hotmail.com
4
مسئول مکاتبه
نویسنده
نویسنده
نویسنده
جنس Absidiaاز خانواده Absidiaceaeو راسته Mucoralesاست که برخی گونههای این جنس به عنوان عوامل ایجادکننده بیماری موکورومیکوزیس در انسان و حیوانات مهم هستند. بهمنظور بررسی روابط فیلوژنتیکی جنس Absidia نمونهبرداری از برخی خاکهای استان مازندارن به عمل آمد. با کشت سوسپانسیون خاک در محیط اختصاصی رزبنگال بیست جدایه مربوط به این جنس جداسازی شد. براساس تشخیص مورفولوژیکی کلیه جدایهها متعلق به گونه Absidia repensبودند. بهمنظور بررسیتنوع ژنتیکی و تجزیه تحلیل فیلوژنتیک جدایهها از شش جدایه DNA استخراج شد و ناحیه ITS (شامل S 8/5) از rDNA تعیین توالی شد وبا نرمافزارهایChromas Pro ، MEGA5 همراه با نمایندگانی از گونههای دیگر که از بانک ژن به دست آمده بودند مورد ارزیابی قرار گرفتند. گونه Absidia repens در درخت فیلوژنتیکی حاصل، در کلاد جداگانه از سایر گونههاقرار گرفت.
Absidia is a genus in the family Absidiaceae in the order Mucorales some species of which are causative agents of mucormycosis in humans and animals. To study phylogenetics and population biology of the genus and its species, some some soil samples were collected from agricultural areas of Mazandaran. Following isolation and purification of isolate an Rose-bengal containing medium, 20 isolates of Absidia were obtained. DNA was extracted from using a CTAB method and subjected to PCR using the primers ITS4 and ITS5 and the amplified fragments were sequenced. The sequences were analyzed by Chromas Pro and MEGA5 softwares and compared with those deposited in GenBnak. Dendrograms derived from the similarity of nucleotide sequences separated Absidia repens isolates, which formed a distinct calde, from the rest of the species.
https://ijpp.areeo.ac.ir/article_15493_4e4ace33d7d5216124ce0db60b1c2fa5.pdf
فیلوژنی
تنوع زیستی
مازندران
Absidiaceae
Absidiaceae
Biodiversity
Mazandaran
phylogeny
per
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایران
بیماریهای گیاهی
0006-2774
2783-5189
2013-12-01
49
4
452
453
15494
Short Article
تأثیر دما در آلودگی گیاهان چغندرقند به ویروس پیچیدگی شدید بوته چغندرقند و بهبودی گیاهان آلوده
EFFECT OF TEMPERATURE ON THE INFECTION OF SUGAR BEET PLANTS BY BEET SEVERE CURLY TOP VIRUS AND ON RECOVERY OF VIRUS-INFECTED PLANTS
محمد حامد قدوم پاریزی پور
1
سید علی اکبر بهجت نیا
akbar_behjatnia@hotmail.com
2
کرامت اله ایزدپناه
izadpana@shirazu.ac.ir
3
مسئول مکاتبه
نویسنده
نویسنده
به منظور بررسی تأثیر دما بر میزان آلودهسازی و غلظت ویروس، گیاهان چغندرقند توسط باکتری حاوی همسانه عفونتزای جدایه ایرانی ویروس پیچیدگی شدید بوته چغندرقند (BSCTV-IR) مایهزنی و سپس در دماهای 20، 25، 30 و Cº35 نگهداری شدند. حضور ویروس در گیاهان در زمانهای 7، 14 و 21 روز پس از مایهزنی توسط پیسیآر سنجیده شد. نتایج نشان داد که بهینه درجه حرارت برای آلودهسازی چغندرقند توسط BSCTV-IR دمای Cº25 میباشد. در دمای Cº35 هیچکدام از گیاهان چغندرقند به این ویروس آلوده نشدند. جهت سنجش بهبودی، گیاهان پس از بروز علائم شاخص بیماری به دماهای ذکر شده منتقل شدند و بهبودی در اولین برگ تازه تشکیل شده گیاه چغندرقند هفت روز پس از نگهداری بوتهها در دمای Cº35 مشاهده گردید. این مدت برای بوتههای نگهداری شده در دماهای 30 ، 30-25، 25 و Cº20 به ترتیب 12، 18، 25 و 28 روز بود. مایهزنی مجدد گیاهان بهبودیافته با ویروس هیچ علائمی را در برگهای جدید ایجاد نکرد که نشاندهنده مقاومت گیاه بهبود یافته به آلودگی مجدد با ویروس مشابه است. سنجش کمی دیاِناِی ویروس توسط واکنش زنجیرهای پلیمراز در زمان واقعی (real-time PCR) کاهش قابل توجه دیاِناِی ویروس را در برگهای بهبودیافته در مقایسه با برگهای دارای علائم نشان داد.
The effect of various temperatures on the infection of sugar beet plants by Iranian isolate of Beet severe curly top virus (BSCTV-IR) was evaluated. Presence of BSCTV-IR in agroinoculated plants was assayed at 7, 14 and 21 days post-inoculation (dpi) using PCR. Based on the infectivity assay, the optimum temperature for BSCTV-IR infection was 25°C at which the mean period between inoculation and the first virus detection was the shortest and the virus concentration was the highest. No virus was detected in plants incubated at 35°C until 21 dpi. To evaluate the effect of temperature on recovery of BSCTV-IR-infected plants, symptomatic plants were incubated at the aforementioned temperatures. The first new leaf showing recovery phenotype emerged 7 dpi at 35 ºC. This period for plants incubated at 30, 25-30, 25 and 20ºC was 12, 18, 25 and 28 days post-incubation, respectively. Thus, recovery occurred faster as the temperature raised. Re-inoculation of recovered plants with the same virus induced no symptoms in newly emerging leaves, indicating the stability of the phenotype of recovered plants against re-infection by the same virus. Quantitative analysis using real-time PCR showed significant decline in viral DNA in either recovered or new leaves emerged after re-inoculation compared to symptomatic leaves.
https://ijpp.areeo.ac.ir/article_15494_73e177e9812472b481eb85143cc5e594.pdf
دما
جمینی ویروس
چغندر قند
فنوتیپ بهبودی
مقاومت
: Beta vulgaris
Geminivirus, Recovery phenotype, Resistance, Temperature
per
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایران
بیماریهای گیاهی
0006-2774
2783-5189
2013-12-01
49
4
455
459
15495
Short Article
تأثیر علفکشهای خاک کاربرد روی وقوع بیماری مرگ گیاهچه رایزوکتونیایی در سه رقم سویا
THE EFFECT OF SOIL HERBICIDES ON INCIDENCE OF RHIZOCTONIAL SEEDLING DAMPING-OFF IN THREE SOYBEAN CULTIVARS
الهام مدیری
1
منصور منتظری
2
نویسنده
مسئول مکاتبه
این پژوهش در سال 90 - 1389 به منظور مطالعه اثر چهار علفکش تری فلورالین، اتال فلورالین، آلاکلر و متریبوزین روی شدت بیماری مرگ گیاهچه رایزوکتونیایی در سویا ارقام ویلیامز، میل82 و کلارک در شرایط خاک سترون و غیر سترون در مؤسسه تحقیقات گیاهپزشکی کشور اجرا شد. در این بررسی، عامل بیماری با خاک داخل هر گلدان تا عمق چهار سانتیمتری آمیخته گردید. میزان بروز بیماری در تیمارها با شاهد بدون علفکش ولی همراه با عامل بیماری مقایسه شد. نتایج کلی این پژوهش نشان داد که بیماری در رقم کلارک بیش از دو رقم دیگر و در خاک سترون بیشتر از خاک غیر سترون به وقوع پیوست. همچنین، در بین علفکشها، تنها تریفلورالین، در مقایسه با شاهد، در افزایش بروز این بیماری تأثیر معنیدار داشت
This study was conducted in 2010-2011 to evaluate the effects of herbicides trifluralin, ethalfluralin, alachlor and metribuzin on the incidence of damping off disease caused by Rhizoctonia solanion soybean varieties Williams, Mill 82 and Clark in sterile or non-sterile soil. The pathogen was grown on PDA and incorporated into the soil of each pod up to four cm depth. The incidence of the disease in herbicide-treated soil was compared with those of untreated soil which was pre-inoculated with the pathogen as control. In these experiments, Clark showed higher disease incidence than other varieties. Also the disease incidence was higher in sterile soil than in non-sterile soil. Compared with the untreated control, only trifluralin, significantly increased the disease incidence.
https://ijpp.areeo.ac.ir/article_15495_ab46b5e2b581224b14f333bb4d29eaae.pdf
Rhizoctonia solani
مرگ گیاهچه
تری فلورالین
اتال فلورالین
آلاکلر
متریبوزین
Alachlor
Damping off
Ethalfluralin
Rhizoctonia solani
Trifluralin
per
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایران
بیماریهای گیاهی
0006-2774
2783-5189
2013-12-01
49
4
461
462
15496
Short Report
مخمرهای عامل و همراه بیماری شانکر شاخه درختان میوه هستهدار
YEAST SPECIES AS THE CAUSAL AGENTS OR ASSOCIATED WITH STEM CANKER OF STONE FRUIT TREES
علائمی مشابه با علائم بیماری شانکر باکتریایی درختان میوه هستهدار ناشی از باکتریPseudomonas syringae pv. Syringaeروی هلو(Prunus persica) و شلیل(Prunus persicae var. nusipersica) در چند نقطه از شهرستانهای خراسان، در طی سالهای 1391و 1390 مشاهده شد. پس از شستشو و ضدعفونی سطحی بافتهای آلوده، سوسپانسیونی از آنها در آب مقطر استریل تهیه و یک قطره از آن روی محیط آگار غذایی به علاوه سوکروز(NAS) کشت داده شد. پرگنههای غالب به دست آمده کرم تا صورتی رنگ، خمیرمانند، براق، محدب و با حاشیه صاف بودند. هیچ یک از جدایهها قادر به ایجاد رنگ فلورسانت روی محیط King-B نبوده ولی برخی از آنها در شمعدانی (Pelargonium×hortorum) بعد از 5-4 و در توتون(Nicotiana tabacum) پس از 11 روز شروع به تولید نکروز مشابه با واکنش فوقحساسیت کردند. لکههای نکروزه و آبسوخته ایجاد شده روی توتون دارای هاله زرد رنگ بوده و بافت نکروزه به همراه هاله پیرامونی به تدریج ولی به کندی گسترش پیدا کرد. بررسیهای اولیه در راستای شناسایی نماینده این جدایهها با توالییابی ناحیه ITS و مقایسه آنها با توالیهای موجود در پایگاه NCBI صورت گرفت که منتهی به یافتن بیشترین شباهت جدایهها به دو گونهadeliensis Cryptococcusو Cryptococcus magnusگردید. این دو گونه با ضریب اطمینان بالایی به عنوان عوامل بیماری جدید شانکر مخمری درختان میوه هستهدارشناسایی شدند. اصول بیماریزایی کخ در مورد نمایندههای هر دو گونه به اثبات رسیده است (Borhani et al. 2012. 11 th European Conference on Fungal Genetics, Philipps-University, Marburg, Germany and Borhani et al. 2012. 13 th International Congress on Yeasts, Univ. Wisconsin, Madison, USA).
تعدادی از جدایههای بهدست آمده دارای ویژگیهای متمایزی از دو گونه یاد شده بودند. پرگنههای این دسته از جدایهها براق، خمیر مانند، به رنگ سپید شیری و تقریباً مسطح و بدون برجستگی مشهود بودند. نمایندههای این گروه در برگ شمعدانی واکنش فوق حساسیت ایجاد کردند ولی در بررسیهای گلخانهای بیماریزا بودن آنها روی هلو قابل اثبات نبود. توالی ناحیه ITS نماینده این گروه از جدایهها(NCBI # JQ039905) 100 درصد شبیه به جدایه تیپ گونه Meyerozyma guilliermondii بود.آنالیز اسیدهای چرب نماینده جدایهها و استرین استاندارد M. guilliermondii CBS# 8417 با کروماتوگرافی گازی شباهت بالای آن دو را از نظر میزان و نوع اسیدهای چرب نشان داد. اسید چرب غالب (40 درصد کل اسیدهای چرب) هر دو جدایه C18:1 بود. در بررسیهای اولیه صورت گرفته، نقش این گونه که در چندین مورد همراه با دو گونه بیماریزای یاد شده از شانکرهای ساقه جدا شد، در بیماری شانکر مخمری درختان هستهدار مشخص نگردیده و این مسئله نیاز به بررسیهای بیشتر دارد. القای واکنش فوقحساسیت در شمعدانی میتواند نشانگر قابلیت بالقوه این گونه مخمر در ایجاد بیماری در یک یا چند میزبان گیاهی تلقی شود.
Canker symptoms similar to those produced by Pseudomonas syringae pv. Syringae were observed on peach (Prunus persica) and nectarine (Prunus persicae var. nusipersica) trees in several fruit tree growing areas in Khorasan in 2011-2012.Symptomatic stem tissues were thoroughly washed under running tap water, surface disinfestated with sodium hypochlorite (2 min. in 0.5 %, ai, hypochlorite), washed in three changes of sterile distilled water (SDW) and the bark tissues were stripped-off and chopped in 1-2 ml of SDW with a sterile scalpel. Drops of the suspensions, following 10-20 min standing at room temperature, were streaked onto plates of sucrose nutrient agar (SNA) and the plates were incubated at 26-28 °C. The predominant isolates recovered had cream to pinkish, circular, glistening, pasty and convex colonies with entire margins. The isolates did not produce fluorescent pigments on medium B of King. A number of isolates induced a hypersensitive(HR)-like reaction in geranium (Pelargonium × hortorum) and in tobacco (Nicotiana tabacum) 4-5 and 11 days after injection of somewhat turbid suspensions, respectively. The necrotic areas or spots formed on tobacco were surrounded by halos and tended to enlarge, albeit, slowly. DNA of a representative from each group of isolates, differentiated by their colony morphology on SNA, was extracted and the ITS region of the rDNA operon was amplified in PCR and sequenced. Based on the identity of the nucleotide sequence of this region with those deposited in GenBank, the two colony types that were proved to be pathogenic to peach and induced a Hr-like reaction in tobacco and geranium were found to belong to the yeast species Cryptococcus adeliensis and C. magnus. Koch’s postulates were fulfilled with representative of both species on peach budlings(Borhani et al. 2012. 11 th European Conference on Fungal Genetics, Philipps-University, Marburg, Germanyand Borhani et al. 2012. 13 th International Congress on Yeasts, Univ. Wisconsin, Madison, USA).
A number of isolates displayed characteristics distinct from those of the two Cryptococcus species described. Colonies of the present isolates were glistening, pasty, milky white in color and very low convex. Blast analysis of the ITS sequence of a representative (NCBI # JQ039905) of this group of isolates, which produced a Hr-like reaction in geranium but appeared to be avirulent on peach in greenhouse tests, showed 100% identity with those of Meyerozyma guilliermondi isolates present in GenBank. The fatty acid methyl ester (FAME) compositions of a representative isolate and a reference of strain Meyerozyma guilliermondi,CBS # 8417, were determined by gas chromatography. The similarity of the two isolates was verified further by the identity of the types and the percentages of fatty acids. C18: 1 was determined to be the predominant fatty acid (40% of the total fatty acid compositions) in both isolates. The role of this third group of yeast isolates, if any, in the stem canker complex, could not be established in the preliminary pathogenicity trials carried out in the present study and remains to be determined in the future. Induction of hypersensitive reaction on geranium may be considered as the potential of this yeast species in causing disease in one or more plant species.
https://ijpp.areeo.ac.ir/article_15496_8aa1cbf66b370562479257224f3a02f7.pdf
per
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایران
بیماریهای گیاهی
0006-2774
2783-5189
2013-12-01
49
4
463
464
15497
Short Report
ردیابی ویروس تریستزای مرکبات در استان گیلان
FIRST REPORT OF Citrus Tristeza Virus FROM GUILAN PROVINCE
هومن ظفری
1
سید مهدی بنی هاشمیان
2
احمد روحی بخش
a_rouibakhsh1066@yahoo.com
3
بنت الهدی بحری
4
نویسنده
نویسنده
نویسنده
نویسنده
ویروس تریستزای مرکبات (Citrus tristeza virus, CTV) عامل مهمترین بیماری ویروسی مرکبات است که در بسیاری از کشورهای مرکبات خیز جهان باعث خسارت فراوانی به این محصول گردیده است. پیکرههای این ویروس محدود به آوند آبکش بوده و به صورت نیمه پایا توسط گونههای مختلف شتهها انتقال می یابد.کانون اولیه آلودگی به ویروس تریستزا در ایران باغات مهدشت در ساری بوده است. انتقال طبیعی ویروس با شته پنبه در مازندران به اثبات رسیده است (رحیمیان و همکاران، 1379). در سال 1390 ردیابی تریستزا در نهالستانهای غرب استان مازندران انجام شد و گیاهان آلوده در بین نهالهایی که از نهالستانهای شرق استان به غرب انتقال یافته و یا با پیوندک آلوده از آن مناطق تکثیر شدهاند، شناسایی شد (ترویجی و همکاران، 1391). همچنین احتمال انتقال آلودگی تریستزا به نهالستانهای استان گیلان به طریق مشابه مطرح گردید. بر این اساس در بررسی اولیه وضعیت سلامت نهالستانهای این استان از نظر بیماری تریستزا در آبان ماه سال 1391، تعداد 20 نهال نارنگی انشو (Citrus unshiu) و پرتقال تامسون ناول (C.sinencis) از سه نهالستان شرق استان گیلان (چابکسر، رحیم آباد و لنگرود) با آزمون سرولوژیکی ایمیونوپرینت (Direct tissue blot immuonoassay) و با آنتیسرم تجاری شرکت بیوربا مورد ارزیابی قرار گرفت و آلودگی در پنج نهال نارنگی انشو روی پایه سیترنج محرز شد. استخراج اسید نوکلئیک از دمبرگ و رگبرگ نهالهای آلوده با استفاده از کیت Rneasy Plant Mini Kit (Qiagen) صورت گرفت. آزمون RT-PCR بر اساس دستورالعمل کیت (Fermentas) Revert Aid برای مرحله RTو آنزیمPCR Master Mix (Fermentas)برای مرحله PCR و استفاده از جفت آغازگر اختصاصی T36cp+/T36cp-، نتایج ردیابی سرولوژیکی را تأیید کرد.
Tristeza caused by Citrus tristeza virus (CTV), is the most important viral disease of citrus worldwide. Serious damages of the disease have been reported from many citrus growing areas of the world. CTV particles are restricted to phloem and are transmitted by aphids in a semipersistent manner. CTV was introduced from Japan to Mahdasht orchards in Mazadaran province in 1969. Its natural spread with the vector Aphis gossipii was shown in the infected areas (Rahimian et al., 2000). Following the transport of virus-infected scions or plants from the east of Mazandaran (infected area) to the western part of the province (Tarviji et al., 2012), the risk of transmission was considered by a similar way in the nurseries of Guilan province. Preliminary survey of the disease was carried out in November 2012. Five of 20 Unshiu (Citrus unshiu) and Thomson navel (C.sinencis) plants on Citrange rootstock were found infected by serological direct tissue blot immunoassay using a commercial antiserum (Bioreba, Switzerland). Infection of the plants was confirmed by a two-step RT-PCR with T36cp+/T36cp- primers after nucleic acid extraction with Rneasy Plant Mini Kit (Qiagen). RT and PCR was carried out respectively according to manufacture protocols of Revert Aid and PCR Master Mix (Fermentas).
https://ijpp.areeo.ac.ir/article_15497_63d188c4c0b8c42508a750c158cc6252.pdf