TY - JOUR ID - 27320 TI - شناسایی و ردیابی مولکولی Phytophthora melonis بر‌اساس ژنوم هسته‌ای و میتوکندریایی* JO - بیماریهای گیاهی JA - IJPP LA - fa SN - 0006-2774 AU - ذو‌الانواری, سیده معصومه AU - مستوفی‌زاده قلمفرسا, رضا AU - دادخدایی, علی AD - دانش‌آموخته کارشناسی ارشد AD - استاد بیماری شناسی گیاهی و دانشیار اصلاح نباتات، دانشکده کشاورزی دانشگاه شیراز AD - دانش آموخته کارشناسی ارشد دانشکده کشاورزی دانشگاه شیراز Y1 - 2017 PY - 2017 VL - 53 IS - 1 SP - 97 EP - 117 KW - اُاُمیکوتا KW - آغازگر اختصاصی KW - پوسیدگی ریشه KW - ردیابی KW - شناسایی DO - N2 - گونه­ی بیمارگر گیاهی Phytophthora melonis از نظر ریخت­شناختی به برخی گونه­های بدون پستانک جنس Phytophthora به­خصوص P. drechsleri شباهت دارد وبنابراین تفکیک این آرایه­های هم­گرا دشوار است. این پژوهش به منظور طراحی آغازگرهای اختصاصی P. melonis بر اساس ژنوم هسته­ای و میتوکندریایی، بررسی اختصاصیت آن­ها در برابر سایر گونه­های همگرا، و بهینه­سازی استفاده از این آغازگرها برای ردیابی P. melonis انجام شد. برای طراحی آغازگر­های اختصاصی گونه­ی P. melonis نُه ژن­ هسته­ای و چهار ژن میتوکندریایی از نظر تفاوت نوکلئوتیدی مناسب بودند، بنابراین سیزده آغازگر اختصاصی طراحی و خصوصیات آن­ها بهینه‌سازی گردید. ردیابی P. melonis با استفاده از پنج جفت از آغازگر­های اختصاصی در بافت مایه­زنی شده­ی گیاهان میزبان آن شامل خیار، خربزه، هندوانه، چغندر­قند و پسته­ انجام شد. با استفاده از آغازگرهای طراحی شده در واکنش زنجیره‌ای پلیمراز تودرتو، تا سطح یک درصد مایه­ی بیماری­زا­ در خاک آلوده و زئوسپورهای بیمارگر تا غلظت­10 زئوسپور در میلی­لیتر در آب آلوده ردیابی شدند. با بررسی اختصاصیت و حساسیت آغازگر­های طراحی شده، کارامد­ترین آن­­­ها مجموعه­ی ITS-M2 (ترکیب آغازگرهای ITS-MF1 و ITS-MR2) در نظر گرفته شد. دمای هم­جوشی بهینه‌سازی شده برای این مجموعه 68 درجه­ی سلسیوس بود. به نظر می‌رسد استفاده از واکنش زنجیره­ای پلیمراز تودرتو با استفاده از مجموعه­ی ITS-M2 به همراه آغازگر­های عمومی ITS4 و ITS6 در نقش آغازگر­های خارجی در حدود 106 برابر حساس­تر از واکنش زنجیره­ای پلیمراز مستقیم است. ­آزمون زنجیره­ای پلیمراز چندگانه‌ی طراحی شده، قادر به ردیابی هم­زمان سه گونه­ی بیمارگر شامل P. melonis، P. drechsleri و P. nicotianae بود.آزمایش‌ها نشان داد که آغازگر­های طراحی شده ابزاری کارآمدی برای ردیابی P. melonis در بافت گیاه، خاک و آب آلوده هستند. UR - https://ijpp.areeo.ac.ir/article_27320.html L1 - https://ijpp.areeo.ac.ir/article_27320_365f032c2347fad3fc89f538a7d734fe.pdf ER -