انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101ANGULAR LEAF SPOT OF SLEEPY MALLOW INCITED BY A PATHOVAR, CLOSELY SIMILAR to Pseudomonas syringae pv. syringaeبیماری لکهزاویهای ختمی خوابآلود ناشی از یک پاتووار مشابه با Pseudomonas syringae pv. syringae *11515205FAپژمان خدایگاننویسندهحشمت الله رحیمیانمسئول مکاتبهمسعود شمسبخشنویسنده0000-0002-4336-7705Journal Article20120130Angular leaf spots of sleepy mallow <em>Malvaviscus</em> <em>penduliflorus</em> have been observed in some areas of Mazandaran and Golestan provinces. The spots were angular, brown and necrotic. A levan positive and oxidase negative pseudomonad was isolated from the symptomatic leaves. The biochemical and physiological characteristics and profile of fatty acid methyl esters of the causal bacterium was very similar to <em>Pseudomonas syringae </em>pv. <em>syringae</em>. Pathogenicity of selected strains was confirmed by inoculation of sleepy mallow with bacterial suspension of several strains. PCR amplification using the <em>syrB </em>specificprimer pairs yielded the expected 720 bp fragment from all strains. In rep-PCR, the fingerprints of the strains from sleepy mallow showed 28% similarity to those of the standard strains of <em>P. s. </em>pv<em>. syringae. </em>However, on the bases of difference in host specifity, some genotypic properties, sequencing of some highly conserved genes (<em>rpoD</em> and <em>gyrB</em>), the strains isolated from angular leaf spot on sleepy mallow justwere similar to <em>Pss</em> but were genetically distinct from other groups and may represent a new pathovar of <em>P. syringae</em> belonged to another genemospeciesبیماری لکهزاویهای ختمی خوابآلود (<em>Malvaviscus pendulifloru</em>)در چند سال متوالی در برخی از مناطق استانهای مازندران و گلستان مشاهده شده است. لکهها به قطر 3 تا 4 میلیمتر، نکروزه، قهوهای رنگ، زاویهای شکل و بدون هاله بودند. از برگهای بیمار، یک سودوموناس اکسیداز منفی و تولید کننده لوان جداسازی گردید. جدایهها در ویژگیهای فنوتیپی ، نوع و میزان اسیدهای چرب سلولی و توالی ناحیه ITS شبیه به پاتووار <em>Pseudomonas syringae</em> pv. <em>syringae</em> بودند و بیماریزایی آنها با مایهزنی به برگهای ختمی خوابآلود، به اثبات رسید. در واکنش زنجیرهای پلیمراز با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن <em>syrB</em> در همه جدایهها، یک قطعه 720 جفت بازی تکثیرگردید. در الگوی انگشتنگاری ,DNArep-PCR، جدایهها از پاتووار <em>P. s</em>. pv. <em>syringae</em>تفکیک شده و میزان شباهت آنها به جدایه مرجع 28 درصد برآورد شد. نتایج حاصل از بررسی مقدماتی دامنه میزبانی و تعیین توالی برخی از ژنهای حفاظت شده ژنومی (<em>gyrB</em>, <em>rpoD</em>) نشان داد که جدایههای بیماریزا در ختمی خوابآلود مشابه با پاتووار<em>Pss</em> بوده اما احتمالاً میتوان آنها را در گروه ژنومی یا پاتووار دیگری قرار داد.انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101DISTRIBUTION AND PARTIAL BIOLOGICAL CHARACTERIZATION OF WHEAT AND BARLEY STRAINS OF WHEAT DWARF VIRUS IN IRANپراکندگی و برخی ویژگیهای بیولوژیکی سویههای گندم و جو ویروس کوتولگی گندم در ایران*173115253FAمائده لطفی پورنویسندهسید علی اکبر بهجت نیامسئول مکاتبه0000-0002-3071-9636علیرضا افشاریفرنویسندهکرامتاله ایزدپناهنویسندهJournal Article20120407Barley yellow dwarf viruses (BYDVs), Cereal yellow dwarf virus (CYDV) and Wheat dwarf virus (WDV) are the causes of dwarfing and yellowing in small grain cereal crops in Iran. WDV consists of at least two strains each adapted to wheat (WDV-W) or barley (WDV-B). In this research, the distribution and genetic variation of WDV-B and WDV-W isolates in Iran were investigated. Infected barley and wheat plants showing dwarfing and yellowing symptoms were collected from cereal fields of Chahar Mahal and Bakhtiari, Fars, and Yazd provinces during 2009-2010 and from other provinces in 2004-226 growing seasons. These samples were subjected to DNA extraction, PCR, and sequencing, using specific WDV primers at species and strain levels. Results showed that WDV was detected in 155 of 270 samples. WDV-W and WDV-B accounted for 55% and 45% of WDV positive samples, respectively. While WDV-B was only isolated from naturally infected barley plants, isolates of WDV-W was isolated from both wheat and barley. The results of this study indicated that in addition to BYDVs, WDV is a major component of yellows complex in cereal fields in Iran. WDV was transmitted from wheat and barley infected plants to healthy plants using leafhoppers collected from cereal fields and reared on plants in the greenhouse. Morphological characteristics especially those of male genitalia indicated that <em>Psammotettix alienus</em> is the WDV vector in Iran.بیماری های کوتولگی و زردی در غلات که توسط ویروس های گروه کوتولگی زرد جو (BYDV)، کوتولگی زرد غلات (CYDV) و ویروس کوتولگی گندم ((WDV ایجاد میشوند خسارت زیادی به این محصولات در ایران وارد مینمایند. حداقل دو سویه از WDV، سویه جو (WDV-B) و سویه گندم (WDV-W)، گزارش شدهاند. در این مطالعه پراکنش سویههای WDV در مزارع غلات ایران مورد بررسی قرار گرفت. بدین منظور از مزارع گندم و جو در سه استان چهارمحال و بختیاری، فارس و یزد طی سالهای 1389-1388 نمونه برداری انجام شد. در مورد این نمونهها و نمونههای مربوط به سالهای 1385- 1384، از چند استان دیگر، مراحل استخراج دی ان ای ویروس، آزمون PCR با آغازگرهای اختصاصی در سطح سویه و تعیین ترادف انجام شد. بررسیها نشان داد که این ویروس در تمام مناطق نمونه برداری شده وجود دارد. از 270 نمونه با علائم کوتولگی و زردی 155 نمونه به WDV آلوده بودند که از بین آنها 85 نمونه (55درصد) آلوده به WDV-W و 70 نمونه (45 درصد) آلوده به WDV-B بودند. نتایج این بررسی نشان داد که در شرایط طبیعی WDV-W علاوه بر گندم، جو را نیز آلوده میکند اما WDV-B به طور طبیعی تنها از جو آلوده جدا می شود. بنابراین هر دو سویه WDV همراه با ویروس های گروه BYDV از عوامل اصلی ایجادکننده زردی و کوتولگی در مزارع غلات ایران هستند. با توجه به پراکنش وسیع WDV در مناطق مختلف کشور، انتقال آن توسط زنجرک به گیاهان گندم و جو به اثبات رسید. شناسایی ناقل WDV با توجه به شکل اندام تناسلی جنس نر انجام شد و گونه <em>Psammotettix alienus</em> به عنوان ناقل WDV در ایران معرفی شد.
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101PATHOGENICITY OF SOME ISOLATES OF PYTHIUM AND PHYTOPHTHORA ON DETACHED SHOOTS AND
SEEDLINGS OF ALMONDبررسی بیماریزایی جدایههایی از Phytophthora و Pythium (sensu lato) روی شاخههای بریده و دانهالهای بادام333915255FAزینب عزیزینویسندهجهانشیر امینیمسئول مکاتبهمهیار شیخ الاسلامینویسندهسعید عباسینویسندهJournal Article20120305During the observations over nurseries and almond orchards of Kermanshah Province in 2010-2011, saplings and fertile trees suspected to infection by <em>Pythium</em> and <em>Phytophthora</em> and the soil around their crown and foots were sampled. After culturing these samples on common and semi-selective media, some isolates of <em>Pythium</em> (sensu lato) and <em>Phytophthora</em> were obtained. These isolates were identified based on their morphological and several physiological characteristics. Pathogenesity tests were performed on excised shoots and seedlings <em>In vitro</em> and <em>In vivo</em> respectively. In this research, 12 isolates, belong to 4 species including <em>Phytophthora cactorum, Pythium aphanidermatum</em>, <em> Ovatisporangium helicoides </em> and <em>Pythium</em> group-G were identified. The isolates were mostly from the soil around the roots and foots of saplings. In pathogenesity test on excised shoots, highly significant differences were found among the treatments based on the rate of disease extension. In this experiment the most disease extension was induced by <em>P. cactorum</em> followed by <em>O. helicoides</em>. There was no significant differences among <em>P. aphanidermatum</em> and <em>P. group-G</em> when compared to the control. In pathogenesity test under greenhouse condition, <em>P. cactorum</em> isolates caused seedling death after 7 days; but the symptoms of seedling death appeared after 40 days, when almond seedlings were exposed to <em>P. aphanidermatum</em> and <em>O. helicoides</em>. <em>P. group-G</em> did not make any pathogenesity on almond seedlings in both experiments. This is the first report of identification and pathogenesity of <em>O. helicoides</em> in Iran.
در بازدیدهایی که طی سالهای 90-1389 از نهالستانها و باغهای مختلف بادام در استان کرمانشاه به عمل آمد، از نهالها و درختان بادام با علایم مشکوک به آلودگی به گونههای پیتیوم و فیتوفتورا و خاک همراه با طوقه و ریشه آلوده نمونه برداری شد. نمونهها در محیطهای کشت عمومی و نیمه انتخابی کشت و جدایههایی از جنسهای <em>Phytophthora</em> ، <em>Ovatisporangium</em> و <em>Pythium </em>بهدست آمده بر اساس ویژگیهای مورفولوژیک و پارهای خصوصیات فیزیولوژیک مطالعه و شناسایی شدند. آزمون بیماریزایی جدایهها روی شاخههای بریده در شرایط آزمایشگاه و همچنین دانهالهای بادام در گلخانه انجام گرفت. در این تحقیق، دوازده جدایه، اکثراً از خاک همراه با طوقه و ریشه به دست آمد که متعلق به گونههای<em>Phytophthora cactorum</em>،<em>Pythium aphanidermatum </em>، <em>Ovatisporangium helicoides</em> و <em>Pythium</em> group-G بودند. در آزمون بیماریزایی روی شاخههای بریده از نظر میزان توسعه بیماری، بین تیمارهای مختلف اختلاف بسیار معنیداری در سطح آماری یک درصد دیده شد. در این آزمون بیشترین میزان توسعه بیماری توسط <em>P. cactorum </em>ایجاد شد و <em>O. helicoides </em> در مرتبه بعدی قرار گرفت. اختلاف میزان توسعه علایم بیماری توسط قارچهای <em>P.aphanidermatum </em>و <em>P.</em> group-G روی شاخههای بریده با شاهد معنیدار نبود. در آزمون بیماریزایی روی دانهالهای بادام در گلخانه جدایههای <em>P. cactorum </em>در مدت 7 روز پس از مایهزنی سبب سبز خشکی و مرگ سریع نهالها شدند. در مورد جدایههای <em>P. aphanidermatum </em>و<em>O. helicoides</em> پس از گذشت 40 روز پس از مایهزنی علایم خشکیدگی روی دانهالهای بادام ایجاد شد، حال آن که <em>P.</em> group-G در هیچ شرایطی علایم بیماری را نشان نداد. این اولین گزارش از شناسایی و بیماریزایی گونه <em>O. helicoides</em> است.انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101BIOLOGY OF Rhizoctonia oryzae-sativae CAUSAL AGENT OF RICE AGGREGATE SHEATH SPOT DISEASE IN GUILAN PROVINCEبررسی زیستشناسی قارچ Rhizoctonia oryzae-sativae عامل لکه موجی غلاف برگ برنج در استان گیلان415015284FAامیررضا امیرمیجانیمسئول مکاتبه0000-0002-4529-4415سیداکبر خداپرستنویسنده0000-0002-7480-4170فریدون پاداشتنویسنده0000-0001-5175-3529بابک ربیعینویسندهJournal Article20111210Rice aggregate sheath spot disease is caused by <em>Rhizoctonia oryzae-sativae</em> (Sawada) and occurs more or less at all paddy fields in Guilan province. In this study some aspects of biology of <em>Rhizoctonia oryzae-sativae</em><em> </em>and optimal growth temperatures were examined. Rice straw colonized with mycelia and sclerotia of <em>Rhizoctonia oryzae-sativae</em> were incubated in different field conditions such as natural field soil surface, 5 cm deep under the soil, flooding condition, on soil surface at the borders of the field. The effects of variable conditions on viability of fungus were studied. Moreover, the effects of different temperatures (5, 0, -5, -10, -15, -20 and -72) on germination and viability of sclerotia were assessed during one month. Optimum growth rate was found to take place at 32 ºC. Results showed that <em>R. oryzae-sativae </em>overwinters as mycelia on the rice straw on the soil surface in the field, soil surface at field margins and as sclerotia in the soil. According to the results 30.4% of sclerotia were able to germinate after one month storage at minus 72 ºCقارچ <em>Rhizoctonia oryzae-sativae</em> عامل لکه موجی غلاف برگ یکی از بیمارگرهای برنج در استان گیلان است. با توجه به شیوع بیماری در اکثر مزارع برنج استان و عدم وجود اطلاعات کافی از زیستشناسی آن، این پژوهش با هدف بررسی برخی از جنبههای زیستشناسی این قارچ صورت گرفت. در این بررسی ضمن اندازهگیری دمای بهینه رشد این قارچ، کاه برنج آلوده شده با میسلیوم و سختینه قارچ در شرایط مختلف مزرعه مانند سطح خاک، عمق پنج سانتیمتری، شرایط غرقاب و سطح خاک حاشیه مزرعه رهاسازی شد و با فواصل زمانی مشخص مورد بررسی قرار گرفت. همچنین امکان بقای سختینه و توانایی جوانهزنی آن در دماهای مختلف (5، 0، 5-، 10-، 15-، 20-، 72- و دمای محیط) به مدت یک ماه ارزیابی شد. بر اساس نتایج به دست آمده دمای بهینه رشد برای جدایههای مورد مطالعه، 32 درجه سلسیوس تعیین شد. بر همین اساس، قارچ شرایط نامساعد زمستان را به صورت میسیلوم روی بقایای گیاهی در سطح خاک مزرعه و حاشیه آن و سختینه در خاک تا فصل رشد بعدی، سپری میکند. همچنین نتایج به دست آمده امکان بقا و زنده ماندن سختینهها را در دماهای زیر صفر ثابت کرد، به طوری که4/30 درصد از سختینههایی که در دمای 72- درجه سانتیگراد قرار داشتند، پس از گذشت یک ماه، روی محیط PDA قادر به جوانهزنی بودند.انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101RELATIONSHIP BETWEEN INCIDENCE AND SEVERITY OF ALTERNARIA BLIGHT DISEASE ON DIFFERENT SPECIES OF BRASSICA IN GONBAD REGIONرابطه بین وقوع و شدت بیماری سوختگی آلترناریایی در گونههای مختلف جنس براسیکا در منطقه گنبد516015285FAمهدی قاسمینویسندهمحمدعلی آقاجانیمسئول مکاتبهابوالفضل فرجینویسندهمحمدرضا سعیدی نژادنویسندهJournal Article20110712Alternaria blight disease, caused by <em>Alternaria</em> spp., damages severely to oil-producing species of <em>Brassica</em> spp. all over the world and reduces the quality and quantity of the oil. To determine the relationships between incidence (<em>I</em>) and severity (<em>S</em>) of Brassica blight disease, and making a model for predicting <em>S</em> based on <em>I </em>values, this research was performed on two genotypes of mustard (j-98-102/51-5 and Bard-1), two genotypes of turnip (Rainbow and Candle), three genotypes of canola (Hayola401, Shiralee and RGS003) and genotype Select 4 (fourth generation of rapeseed-mustard cross) in agricultural research station of Gonbad, Iran as a completely randomized block design in three replications. Severity of disease in the specified time intervals was measured until the appearance of withdrawal symptoms. Results showed that the Allometric model (natural logarithm transformation of <em>I</em> and <em>S</em>) with about 66 % of <em>R</em><sup>2</sup> had the best fitting for the collected data and therefore it was the best model to describe <em>I</em>-<em>S</em> relationships in Alternaria blight of <em>Brassica</em> spp. Based on the regression slope of Ln transformed values of <em>I </em>and <em>S</em>, the genotypes were classified in 3 groups. The first group includes Bard-1 genotype with high slope (1.48). Candle, Select4 and RGS003 were placed in the second group with moderate slope (1.25) and the third group was included genotypes Rainbow, Shiralee and J-98 with the least slope (1.15).بیماری سوختگی آلترناریایی کلزا ناشی از <em>Alternaria</em> spp. در بسیاری از نقاط جهان خسارتهای شدیدی را به گونههای روغنی براسیکا وارد میکند و باعث کاهش کمی و کیفی روغن میشود. این تحقیق به منظور تعیین رابطه کمی بین میزان وقوع (<em>I</em>) و شدت (<em>S</em>) بیماری و ارائه مدلی جهت پیشبینی شدت بیماری بر اساس ارزیابی میزان وقوع آن در دو ژنوتیپ خردل زراعی ( j-98-102/51-5 و Bard-1)، دو ژنوتیپ شلغم روغنی (Rainbow و Candle) و سه ژنوتیپ کلزا (Hayola401، Shiralee و RGS003 ) و ژنوتیپ Select4 (نسل 4 تلاقی کلزا و خردل زراعی) در ایستگاه تحقیقات کشاورزی گنبد و در قالب طرح بلوکهای کامل تصادفی در سه تکرار انجام شد. برای این منظور، شدت بیماری در فاصلههای زمانی مشخص از ظهور علائم تا زمان برداشت اندازهگیری شد. در تجزیه و تحلیلها، مدل آلومتری (تبدیل لگاریتم طبیعی <em>I</em>و <em>S</em>) با ضریب تبیین حدود 66 درصد، بهترین برازش را با دادههای جمعآوری شده ایجاد کرد. ژنوتیپها بر اساس تجزیهی واریانس شیب خط رگرسیون لگاریتم طبیعی بین وقوع و شدت بیماری، در سه گروه قرار گرفتند. گروه اول شامل ژنوتیپ Bard-1 با شیب بالا (48/1)، گروه دوم شامل سه ژنوتیپ Candle ، Select4 و RGS003 با شیب متوسط (25/1) و گروه سوم شامل ژنوتیپهای Rainbow،Shiralee ، J-98 و Hayola401با شیب کم (15/1) بود.انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101GENETIC VARIATION OF BERMUDA GRASS SOUTHERN MOSAIC VIRUS ISOLATES BASED ON SEQUENCE OF 3' REGION OF GENOMEبررسی تنوع ژنتیکی جدایههای ویروس موزائیک جنوبی مرغ بر اساس ترادف نوکلئوتیدی ناحیه ´3 ژنوم617515286FAفریده فرح بخشنویسندهمحمود معصومیمسئول مکاتبهعلیرضا افشاریفرنویسندهکرامت اله ایزدپناهنویسندهJournal Article20120205Bermuda grass southern mosaic virus (BgSMV) is a widespread potyvirus inducing mosaic on Bermuda grass in warm regions of southern Iran. In this study, various geographical isolates of the virus were compared phylogenetically. Bermuda grass samples showing mosaic symptom were collected from Jiroft, Bushehr, Borazjan, Ramhormoz, Andimeshk, Shushtar, Behbahan and Darab. Viral RNA was extracted and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was conducted using specific primers for amplification of the 3′ region (CP- UTR) of the viral genome. PCR- products were cloned and sequenced. The sequences of CP- UTR region of BgSMV isolates were compared with each other and with available sequences of cereal potyviruses in the GenBank. Phylogenetic analyses showed that all sequences were grouped into six clades of BgSMV, <em>Maize dwarf mosaic virus</em> (MDMV), <em>Sugarcane mosaic virus</em> (SCMV), <em>Johnson grass mosaic virus</em> (JGMV), <em>Sorghum mosaic virus</em> (SrMV), Iranian Johnson grass mosaic virus (IJMV) and <em>Zea mosaic virus</em> (ZeMV). IJMV and ZeMV were grouped in the same clade. Among potyviruses, BgSMV was close to MDMV. However it had an additional 90- nucleotide stretch in frame (30 amino acids) in the 5′ region of the coat protein compared with MDMV. This difference was consistent in all BgSMV isolates. The mean of the nucleotide similarity in CP- UTR region among BgSMV isolates was 98.1% which indicates low level of genetic diversity in intra- population of BgSMV. Despite the high nucleotide sequence similarity between BgSMV and MDMV, differences between the two viruses in host range and serology, and presence of additional 90 nt in the 5' region of CP gene, make BgSMV a distinct potyvirus species close to MDMV.ویروس موزائیک جنوبی مرغ (Bermuda grass southern mosaic virus, BgSMV)، فراوانترین ویروس مولد موزائیک در مرغ در نواحی گرمسیری جنوب ایران میباشد. به منظور تعیین تنوع ژنتیکی BgSMV، گیاهان مرغ با علائم موزائیک از جیرفت، بوشهر، برازجان، رامهرمز، اندیمشک، شوشتر، بهبهان و داراب جمعآوری و ناحیه ´3 ژنوم آنها با استفاده از آغازگرهای اختصاصی این ویروس با روش RT-PCR تکثیر و همسانهسازی شد. ناحیه CP-UTR این جدایهها بههمراه تعدادی از ترادفهای پوتی ویروسهای غلات موجود در بانک ژن مقایسه و پس از انجام همردیفسازی چندگانه، مورد تجزیه و تحلیل فیلوژنتیکی قرار گرفت. جدایههای مورد مقایسه در درخت فیلوژنتیکی در 6 شاخه جداگانه قرار گرفتند که عبارت بودند از: BgSMV، ویروس موزائیک کوتولگی ذرت (Maize dwarf mosaic virus, MDMV)، ویروس موزائیک نیشکر (Sugarcane mosaic virus, SCMV)، ویروس موزائیک قیاق ( Johnson grass mosaic virus, JGMV)، ویروس موزائیک سورگوم (Sorghum mosaic virus, SrMV) ودو ویروس موزائیک ایرانی قیاق ( Iranian Johnson grass mosaic virus, IJMV) و موزائیک زآ ( Zea mosaic virus, ZeMV) که در یک شاخه قرار گرفتند. در بین پوتی ویروسها، BgSMV بیشترین تشابه را با MDMV داشت. اما در ناحیه 5 ژن پروتئین پوششی BgSMV، 90 نوکلئوتید (معادل 30 آمینو اسید) بیشتر از MDMV داشت و این مساله در تمام جدایههای BgSMV صادق بود. میانگین درصد تشابه نوکلئوتیدی ناحیه CP-UTR بین جدایههای BgSMV، 1/98 درصد بهدست آمد که نشاندهنده تنوع ژنتیکی پایین این ویروس در این ناحیه از ژنوم است. به رغم وجود تشابه نوکلئوتیدی بالای BgSMV با MDMV، با توجه به تفاوتهای اساسی از نظر دامنه میزبانی و سرولوژی بین دو ویروس و وجود یک قطعه 90 نوکلئوتیدی اضافی در ناحیه ´5 ژن CP، BgSMV به عنوان گونهای نزدیک به MDMV در جنس پوتی ویروس در نظر گرفته میشود.انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101EVALUATION OF THE RELATIVE RESISTANCE OF SIX SUNFLOWER CULTIVARS TO Alternaria alternata
EVALUATION OF RELATIVE RESISTANCE OF SIX SUNFLOWER CULTIVARS TO Alternaria alternata *ارزیابی مقاومت نسبی شش رقم آفتابگردان در برابر گونه Alternaria alternata778215287FAسیما خدایینویسندهمهدی ارزنلومسئول مکاتبهاسداله بابای اهرینویسندهمصطفی ولیزادهنویسندهJournal Article20120305Leaf spot disease is one of the most destructive foliar diseases of sunflower. The use of resistant genotypes is potentially one of the most economical means for the disease control. Agreenhouse assay was used to evaluate resistance of six sunflower cultivars, namely Dorsefid, Ghalami, Pestei, Master-op, Azargol, and Euroflor against three isolates of <em>A. alternata</em>. The isolates showed significant differences in pathogenicity. The reactions of cultivars to fungal isolates were different; however, none of the cultivars showed high levels of resistance. This is the first study on the evaluation of partial resistance of some of the sunflower cultivars to the Alternaria leaf spot disease in Iran.بیماری لکهبرگی آفتابگردان یکی از مهمترین بیماریهای اندامهای هوایی این محصول به شمار میآید. کشت ژنوتیپهای مقاوم به این بیماری بدون تردید یکی از اقتصادیترین روش کنترل بیماری به شمار میرود. این مطالعه با هدف ارزیابی واکنش ارقام رایج روغنی و آجیلی رایج در مزارع استان آذربایجانغربی در مقابل بیماری انجام شد. مقاومت نسبی شش رقم آفتابگردان رایج تحت کشت در این استان شامل سه رقم آجیلی دورسفید، پستهای، قلمی و سه رقم روغنی آذرگل، اوروفلور، Master-op در شرایط گلخانه نسبت به سه جدایه از گونه <em>A. alternata</em> سنجیده شد. نتایج بررسی نشان داد که اختلاف معنیداری بین جدایهها از نظر میزان بیماریزایی وجود دارد. قدرت بیماریزایی جدایهها در بخشهایی بالایی و پایینی کانوپی نیز متفاوت بود. با اینکه ارقام مختلف واکنشهای متفاوتی در مقابل بیماری نشان دادند، اما بهطور کلی تمام ارقام در برابر بیماری آسیبپذیر بودند. تحقیق حاضر، اولین مطالعه در زمینه تعیین مقاومت نسبی برخی ارقام آفتابگردان در مقابل بیماری لکهبرگی آلترناریایی در ایران میباشد.انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101TRANSMISSION AND NATURAL HOSTS OF TURNIP CURLY TOP VIRUSانتقال و میزبانهای طبیعی ویروس پیچیدگی برگ شلغم839115288FAسارا رضوی نژادنویسندهجهانگیر حیدرنژادمسئول مکاتبهJournal Article20120313Turnip curly top virus (TCTV) is a unique geminivirus which has been recently reported from turnip growing farms of Fars province. Despite differences in the gene organization of this virus compared to other geminiviruses, most of its biological properties including vector and natural hosts have remained uncharacterized. In the present work the ability of two leafhopper species, <em>i.e.</em>, <em>Circulifer haematoceps</em> and <em>Orosius albicinctus</em> to transmit TCTV was studied. The results showed that TCTV is efficiently transmitted from infected plants to healthy turnip seedlings by <em>C. haematoceps</em> under greenhouse conditions. Infection of turnip plants was verified by symptoms appearance and PCR. Typical TCTV symptoms including inward rolling of the leaf margins and swelling of veins on the lower leaf surfaces of inoculated plants was observed 10-20 days post inoculation. The presence of virus in symptomatic plants was confirmed by PCR using specific TCTV primer pairs. In order to identify more natural hosts of the TCTV, plant samples from different crops and weed species were collected in severely TCTV infected farms and tested by PCR using two specific primer pairs. PCR results showed the presence of TCTV infection in radish samples showing curly top and chlorosis symptoms. Furthermore, TCTV infection of symptomless weed species including herb sophia, bugloss, black nightshade and flower of an-hour was confirmed by PCR test. To compare the sequence of radish isolate of TCTV with available TCTV sequences in GenBank, full-length genome of the radish isolate was amplified by rolling circle mechanism using phi DNA polymerase, cloned and sequenced. Sequence comparison showed 93-99% homology between radish and TCTV isolates. Results of this study indicated that in contrast to most curtoviruses, TCTV has a narrow natural host range.ویروس پیچیدگی برگ شلغم (Turnip curly top virus, TCTV) یک جمینی ویروس جدید است که اخیراً از مزارع شلغم استان فارس گزارش شده است. از آنجا که این ویروس از نظر سازماندهی ژنوم از سایر جمینی ویروسها متفاوت است، هنوز بسیاری از ویژگیهای بیولوژیکی آن از جمله ناقل و سایر میزبانهای طبیعی آن مورد مطالعه قرار نگرفته است. به منظور شناسایی ناقل TCTV در شرایط آزمایشگاهی، توانایی زنجرکهای <em>Circulifer haematoceps</em> و <em>Orosius albicinctus</em> در انتقال ویروس، مورد بررسی قرار گرفت. نتیجه این مطالعه نشان داد که زنجرک <em>C. haematoceps</em> با راندمان بالائی در شرایط گلخانه ویروس عامل بیماری را از گیاهان آلوده به بوته های سالم انتقال میدهد. آلودگی گیاهان با ایجاد علائم مشخص بیماری شامل پیچیدگی شدید برگها به سمت بالا و تورم رگبرگها در پشت برگها و تشخیص وجود ویروس در گیاهان آلوده با استفاده از آزمون PCR به اثبات رسید. برای تعیین سایر میزبانهای طبیعی TCTV، نمونههای گیاهی شامل گیاهان زراعی و علفهای هرز از اطراف و داخل مزارع بهشدت آلوده شلغم جمعآوری و آلودگی گیاهان با تشخیص وجود ویروس در آنها با استفاده از آزمون PCR و دو جفت آغازگر اختصاصی مورد بررسی قرار گرفت. بر این اساس، از میان نمونهها، تنها آلودگی طبیعی تربچه با علائم پیچیدگی برگ و سبزردی و علفهای هرز خاکشیر، گاوزبان کوچک، تاجریزی سیاه و گل یک ساعتی (بامیه سه شاخ) که همگی بدون علائم مشخصی بودند، اثبات گردید. به منظور مقایسه جدایه تربچه با جدایههای شلغم TCTV، ژنوم کامل جدایه تربچه توسط آنزیم فی دی اِن اِ پلی مراز به روش دایره غلتان تکثیر و بعد از همسانهسازی, تعیین ترادف گردید. مقایسه توالی کامل ژنوم جدایه تربچه با ژنوم جدایههای شلغم موجود در بانک جهانی ژن نشان داد که میزان شباهت آن با سایر جدایهها 99-93 درصد است. این نتایج نشان میدهد که TCTV بر خلاف اکثر کرتوویروس ها دارای دامنه میزبانی محدودی در طبیعت است.
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101BIOLOGICAL AND PHYLOGENETIC STUDY OF
Cauliflower mosaic virus ON CANOLA IN IRANبررسی خصوصیات بیولوژیکی و فیلوژنتیکی ویروس موزائیک کلمگل (Cauliflower mosaic virus) از گیاه کلزا در ایران939915289FAمریم قادری سهیمسئول مکاتبهنوح شهرآییننویسندهفرشاد رخشنده رونویسندهJournal Article20110811<em>Cauliflower mosaic virus</em> (CaMV) causes yield losses in plants of Brassicaceae family including canola (<em>Brassica napus</em>) . In order to detect CaMV in canola, a total of 684 leaf samples showing various virus-like symptoms were collected in several provinces of Iran including Tehran, Ghazvin, Chaharmahal-Bakhtiari, Mazandaran, Ardabil, West Azarbayejan and Fars provinces. Using a polyclonal antiserum and DAS-ELISA method, samples were tested for the presence of CaMV. ELISA positive isolates from 7 provinces, were used for further studies. Biological diversity of CaMV isolates was evaluated by their ability to infect turnip, kohlrabi and datura. All isolates under study infected turnip, producing local lesions of different sizes and timing, whereas, no symptom was obsereved on kohlrabi and datura. Specific primers amplified an 840 bp fragment of ORF V. Phylogenetic analysis grouped all Iranian isolates and two GenBank isolates (Cabb-D/H, M10376, Xinjiang, AF140604) in one cluster, while all other CaMV isolates from GenBank formed a separate cluster.ویروس موزائیک کلمگل (CaMV) یکی از ویروسهای مهم آلودهکننده و خسارتزا در گیاهان تیره <em>Brassicaceae</em> از جمله کلزا (<em>Brassica napus</em> L.) است. جهت ردیابی CaMV در گیاه کلزا، در مجموع 684 عدد از نمونههای برگی دارای علائم ویروسی از مزارع کلزای استانهای تهران، قزوین، چهارمحال و بختیاری، مازندران، اردبیل، آذربایجان غربی و فارس جمعآوری شد. نمونهها با روش سرولوژیک DAS-ELISA با آنتی سرم چند همسانهای اختصاصی برای وجود CaMV مورد ارزیابی قرار گرفتند. سپس جدایههای CaMV که توسط آزمون الایزا وجودشان تأیید شده بود به نمایندگی از 7 استان، برای مطالعه بیشتر انتخاب شدند. برای بررسی تنوع بیولوژیکی، از علائم مشخصه و متمایز کننده این ویروس روی دو میزبان شلغم، کلم قمری و تاتوره استفاده شد. همه جدایهها در شلغم لکههای موضعی ایجاد کردند لکن اندازه و زمان ظهور در برخی جدایهها متفاوت بود. در کلمقمری و تاتوره هیچ علائمی دیده نشد. تکثیر ژن مربوط به پروتئین رپلیکاز در چارچوب خوانش شماره 5 از ژنوم ویروس، در آزمون PCR با استفاده از جفت آغازگرهای اختصاصی با تشکیل باند 840 جفت بازی نتایج مثبت آزمون الایزا را تأیید کرد. مطالعات فیلوژنتیکی و ترسیم درخت تبارزایی نشان داد 8 جدایه مذکور به همراه دو جدایه از کشور چین (Xinjiang, AF140604) و مجارستان (Cabb-D/H, M10376)، در یک شاخه و بقیه جدایههای موجود در بانک جهانی ژن در شاخه جداگانه قرار میگیرند.
انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101IDENTIFICATION OF Cercospora beticola ISOLATES, THE CAUSAL AGENT OF CERCOSPORA LEAF SPOT DISEASE OF SUGAR BEET, USING SPECIES-SPECIFIC PRIMERSشناسایی جدایههایCercospora beticola عامل بیماری لکه برگی سرکوسپورایی چغندرقند با استفاده از آغازگرهای اختصاصی10110515290FAJournal Article20120205Cercospora leaf spot, caused by <em>Cercospora beticola</em>, is one of the most important foliar diseases of sugar beet. Due to the problems associated with traditional methods in the identification of <em>Cercospora</em> species, in the present study two sets of previously designed <em>Cercospora beticola</em>-specific primers based on calmodulin and actin genes were used for the molecular identification of <em>C. beticola</em> isolates. For this purpose, two standard isolates of <em>C. beticola</em> together with the other isolates recovered from sugar beet plants with leaf spot disease symptoms in present study were subjected to PCR amplification. Efficacy of primer sets were tested on the <em>Cercospora</em> isolates recovered from weed plants with leaf spot symptoms, in present study. Our results showed that the primer set based on actin gene amplified a 959 bp PCR product from the all of the isolates tested in this study. This primer set failed to distinguish <em>C. beticola</em> from the other <em>Cercospora</em> spp. isolated from weeds as well as other fungal groups. The results of multiplex PCR assay using primer sets based on calmodulin gene yielded 234 bp PCR product from all of the <em>Cercospora</em> spp. tested in this study and only a 176 bp PCR product from <em>C. beticola</em> isolates; such that successfully discriminated C<em>. beticola</em> from the other <em>Cercospora</em> isolates. The calmodulin genes primer sets can be used for the screening of <em>Cercospora beticola</em> from the other <em>Cercospora</em> spp. and for the detection and the determination of the host range of <em>Cercospora beticola</em> as well. لکه برگی سرکوسپورایی چغندرقند با عامل <em>Cercospora beticola</em>یکی از مهمترین بیماریهای اندامهای هوایی چغندرقند میباشد. با توجه به مشکلات موجود در شناسایی گونههای مختلف <em>Cercospora</em> بر اساس خصوصیات ریختشناسی، در این تحقیق دو مجموعه آغازگرهای اختصاصی طراحی شده بر اساس توالی ژن کالمودولین و اکتین جهت تشخیص مولکولی اینگونه مورد استفاده واقع شد. برای این منظور جدایههای استاندارد <em>C. beticola</em> همراه با دیگر جدایههای این گونه که از گیاهان چغندرقند جداسازی شدند، مورد استفاده قرار گرفتند. کارایی این آغازگرها روی جدایههای <em>Cercospora</em> جمعآوری شده از علفهای هرز نیز ارزیابی گردید. جفت آغازگر طراحی شده بر اساس توالی ژن اکتین قادر به تشخیص اختصاصی <em>C. beticola</em>از دیگر گونههای این جنس و دیگر گروههای قارچی نبود. آغازگرهای مبتنی بر ژن کالمودولین قطعهای به طول 234 جفت باز از تمامی جدایههای <em>Cercospora</em> و قطعهای به طول 176 جفت باز را به صورت اختصاصی از جدایههای <em>C. beticola</em> تکثیر و با موفقیت گونه <em> C. beticola</em>را از دیگر گونههای این جنس تفکیک نمودند. بنابراین از این مجموعه آغازگر میتوان برای غربال کردن گونه <em>C. beticola</em>از دیگر گونههای این جنس و ردیابی و تعیین دامنه میزبانی گونه <em>C. beticola</em> استفاده نمود. انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101Notes on Iranian smut fungiگزارشی در مورد سیاهکهای ایران10711215363FAمهرداد عباسیمسئول مکاتبهکلمن ونکینویسندهسحر صمدینویسندهسید علیرضا اسمعیلزاده حسینینویسندهJournal Article20120708The following new findings about Iranian smut fungi are presented: 1-<em>Ustilago hordei</em> ×<em> U. nuda</em> hybrids are reported on <em>Hordeum vulgare</em> from Yazd province. Our study showed that main causal agent of covered smut in the province is above hybrids. 2- <em>Urocystis tianschanica</em> is newly reported from Iran on <em>Critesion violaceum</em>. 3- <em>Tranzscheliella iranica</em> is also reported from Yazd province, Deh Bala. Before our report, this species was known only from the type locality. 4- Revision of herbarium specimens of infected <em>Loliolum subulatum</em> revealed that smut species on these specimens belongs to <em>Tilletia lolioli</em> not <em>T. bromi</em>. All above mentioned taxa are documented by microphotographs and Persian descriptionاطلاعات جدیدی در مورد سیاهکهای ایران ارایه میگردد. هیبرید <em>Ustilago hordei</em> ×<em> U. nuda</em> روی جو در استان یزد به عنوان عامل غالب سیاهک سخت جو گزارش میشود. گونه <em>Urocystis tianschanica</em> روی <em>Critesion violaceum</em> گزارش میگردد. گونه <em>Tranzscheliella iranica</em> برای دومین بار بعد از نمونه درج شده در پروتولوگ بازیابی و برای اولین بار بهطور مصور تشریح میشود. همچنین <em>Tilletia loliolli</em> به عنوان عامل سیاهک <em>Loliolum subulatum</em> در ایران معرفی میشود.انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101EVALUATION OF PEROXIDASE ACTIVITY IN TWO RESISTANT AND SUSCEPTIBLE SESAME GERMPLASMS TO Fusarium DAMPING OFF CAUSED BY Fusarium oxysporum f.sp sesamiارزیابی فعالیت آنزیم پراکسیداز در دو توده مقاوم و حساس کنجد نسبت به بیماری بوتهمیری فوزاریومی با عامل Fusarium oxysporum f.sp sesami *11311815364FAاعظم فلاح پورینویسندهحشمت الله امینیانمسئول مکاتبهسید علیرضا اسمعیلزاده حسینینویسندهJournal Article20110610Sesame damping-off caused by <em>Fusarium oxysporum </em>f.sp<em>. sesami</em> is one of the most important diseases of<em> Sesamum indicum </em>L.in the world. In this work,the activity of peroxidase enzyme was assayed as a resistance mechanism in Asfij local germplasm (Bahabad, Yazd province) as resistant and Kahnoj local germplasm (Kerman province) as susceptible germplasm. Fifteen isolates of causal agent were isolated from sesame farms in Yazd province and one isolate with the highest pathogenicity potential was selected and used to determine hostrange. Among ten species of several plant families that were artificially inoculated with this pathogen, only sesame showed disease symptoms. Evaluation of peroxidase activity in tolerant and susceptible germplasms in 2, 4, 6, 8, 10 and 12 days after inoculation with <em>Fusarium oxysporum </em>f. sp<em>. sesami</em> showed that peroxidase enzyme activity increases in resistant germplasm with highest level in4 days after inoculation. The activity of peroxidase was decreased 4 days after inoculation. In susceptible germplasm, enzyme activity was increased slightly in low quantity. In conclusion the results show that peroxidase activity play probable role in induction of plant resistance against outbreak of plant pathogens.
کنجد (<em>Sesamum indicum </em>L.) از گیاهان روغنی است که کشت آن در دنیا رایج میباشد. بوتهمیری فوزاریومی کنجد با عامل<em>Fusarium oxysporum </em>f.sp<em>. sesami</em>، یکی از مهمترین بیماریهای این گیاه دردنیا میباشد.دراینتحقیقمیزانفعالیت آنزیمپراکسیدازبهعنوان یکیازمکانیسمهای دخیل درمقاومت، در توده محلی آسفیج (بهاباد، یزد) به عنوان توده مقاوم و توده محلی کهنوج (کرمان) به عنوان توده حساس به این بیماری بررسیشد.بدینمنظورازنمونههایجمعاوریشدهاز سطحمزارعکنجداستانیزد،15جدایه <em>F</em><em>.</em><em> oxysporum</em> جداسازیوخالصسازیشدواز اینمیانجدایهایکهدارایبالاترینسطح بیماریزاییبودانتخابودرآزمونتعییندامنهمیزبانیمورداستفادهقرارگرفت.دربررسیدامنهمیزبانیعاملبیماری،ازبین ده گونهگیاهیمتعلقبهخانوادههایمختلفکهبهطورمصنوعیباعاملبیماریآلودهشدند،تنهاگیاه کنجد علائمبیماریرانشانداد کهبیانگراینمطلببودکهجدایهمربوطه<em> F</em><em>.</em><em> oxysporum</em> f.sp<em>. sesami</em> میباشد. درمرحلهبعدیتحقیق،میزان فعالیت آنزیم پراکسیدازتودههایمقاوموحساس کنجد در2، 4، 6، 8، 10 و 12روزپسازمایهزنیباقارچعاملبیماریاندازهگیریشد. فعالیتآنپسازمایهزنیباقارچدرتودهمقاومباشیبتندیافزایشودرروزچهارمبهاوجخودرسیدوسپسکاهشیافت. ولیدرتودهحساس،افزایشفعالیتآنزیمبه میزان کمتریرخداد. نتایج این تحقیق بیان کننده این مطلب است که میزان افزایش آنزیم پراکسیداز در گیاه، میتواند نقش احتمالی در بروز القا مقاومت داشته باشد.انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101STUDY ON RESISTANCE LEVELS OF TWO COMERCIAL GRAFTED GRAPEVINE CULTIVARS (Vitis vinifera L.) ON RESISTANT ROOTSTOCKS TO CROWN GALLبررسی میزان مقاومت ترکیب پیوندی دو رقم انگور تجاری(Vitis vinifera L.) روی پایههای مقاوم به بیماری سرطان طوقه11912315365FAحسن محمودزادهنویسندهمشهید هنارهمسئول مکاتبهJournal Article20110809Grafted and rooted cuttings of grapevines were inoculated with six pathogenic strains of <em>Rhizobium</em> <em>vitis</em>. Evaluation of infection severity was done based on the number, size and weight of galls on vines, four months after inoculation and in experiment duration of six years. Results showed that vinifera varieties were very sensitive to crown gall. Weight, number and size of galls induced on grafted vines on H4 and H6 was less than those on other vines. Scions grafted on rootstocks H4 and H6 had a 21.5% and 6.8% incidence compared to 55% for self-rooted vines. During six years 90% of self-rooted vines died, while 18% and 5% of the grafted vines on H4 and H6 hybrids were dead, respectively. The highest yield was found in the Red Sahebi grafted vines on H6 rootstock (2.98 kg/ vine) and the lowest was in self-rooted vines (1.25 kg/vine) and on others (2.25 kg/ vine), respectively.
نهالهای غیرپیوندی و پیوندی دو رقم انگور تجاری روی پنج دورگ بین گونهای با شش سویه بیماریزای <em>Rhizobium vitis</em> مایهزنی شدند. ارزیابی آلودگی نهالها با بروز بیماری براساس تعداد، اندازه و وزن گالهای رشد کرده، پس از چهار ماه انجام و درصد نهالهای سالم تا پایان آزمایش معیار مقاومت به بیماری محسوب شد. نتایج نشان داد که ارقام تجاری در گروه بسیارحساس قرار دارند. میزان موفقیت پیوند بین پایهها اختلاف نداشته ولی تعداد، وزن و اندازه غدههای ایجاد شده در تاکهای پیوندی روی پایههای H4 و H6 از سایرین کمتر بود. طی شش سال بیش از 90% نهالهای غیرپیوندی، 18% روی پایه H4 و کمتر از 5% روی پایه H6 از هر دو رقم از بین رفتند. عملکرد هر دو رقم پیوند شده روی پایه H6 (98/2 کیلوگرم /تاک) بیشتر از شاهد (25/1کیلوگرم/تاک) و سایر پایه ها (25/2 کیلوگرم/تاک) بودانجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101BIOLOGICAL CONTROL OF APPLE BLUE MOLD DISEASE WITH Metschnikowia pulcherrima ALONE AND IN COMBINATION WITH SILICON AND ITS MECHANISMS OF ANTAGONISMکنترل بیولوژیک بیماری کپک آبی سیب توسط مخمر Metschnikowia pulcherrima و بررسی امکان تلفیق آن با سیلیکون و برخی مکانیسمهای دفاعی12312915377FAلیلا ابراهیمینویسندهحسن رضا اعتباریانمسئول مکاتبهحشمت اله امینیاننویسندهنوازاله صاحبانینویسندهJournal Article20111017Biocontrol activity of <em>Metschnikowia pulcherrima</em> alone and in combination with silicon against <em>Penicillium expansum</em> and its machanisms of antagonisms was evaluated. Percentage of inhibition mycelial growth of pathogen in dual culture, volatile test and non-volatile test were evaluated. To evaluate the direct effect of silicon on mycelial growth of<em> P. expansum in</em> <em>vitro</em>, it was added at different concentrations to PDA medium. The effect of silicon on populations of yeast in NYDB was determined after 24 and 48h. Silicon at 0.6%(wt/vol) or above completely inhibited mycelia growth of pathogen and decreased yeast populations. For determining the effect of <em>M. pulcherrima</em> alone and in combination with silicon in controlling disease during storage, fruits were wounded using a sterile nail. Each wound was treated with 20µl of <em>M. pulcherrima</em> suspension, solution of silicon in different concentrations, antagonist suspension amended with silicon at different concentrations, and sterile distilled water as the control. After 24h, 20µl of conidia suspension of the pathogen was applied, and fruits were transferred to storage at 4 and 20˚C. At 4˚C and 20˚C after 45 and 15 days, respectively, lesion areas were measured and the population of yeast in the wound was determined by serial dilution. A combination of silicon with yeast reduced the decay of apple better than silicon and yeast alone. Peroxsidase activity and total phenolic content were significantly enhanced by yeast treatmentsچکیده: فعالیت بیوکنترلی مخمر <em>Metschnikowia pulcherrima</em> به تنهایی و در ترکیب با سیلیکون علیه قارچ <em>Penicillium expansum</em> و توانایی مخمر برای القای پاسخهای دفاعی در بافت میوه سیب مورد بررسی قرار گرفت. در شرایط آزمایشگاهی، میزان درصد بازدارندگی از رشد میسلیومی قارچ بیمارگر با انجام آزمونهای کشت متقابل، متابولیتهای غیرفرار و مواد فرار مورد آزمایش قرار گرفت. در شرایط آزمایشگاهی، غلظتهای مختلف سیلیکون رشد میسلیومی قارچ عامل بیماری را بهخوبی کنترل کرد. غلظتهای مختلف سیلیکون در شرایط آزمایشگاهی در محیط مایع روی جمعیت مخمر تأثیر چندانی نداشت. در بررسیهای انباری، هر یک از زخمهای روی میوهها با µl20 سوسپانسیون مخمر و سیلیکون به تنهایی و ترکیب مخمر با غلظتهای مختلف سیلیکون تلقیح شدند. بعد از 24 ساعت µl20 سوسپانسیون اسپور قارچ بیمارگر در محل زخمها مایهزنی شد. سپس سیبها در دو دمای C˚4 و C˚20 نگهداری شدند. قطر لکهها در دمای C˚4 و C˚20، به ترتیب، چهلوپنج و پانزده روز بعد از مایهزنی اندازهگیری شد. سیلیکون تأثیر معنیداری بر جمعیت مخمر در محل زخمها نداشت. در هر دو شرایط دمایی مخمر همراه با سیلیکون اثر کنترلی بهتری نسبت به مخمر و سیلیکون به تنهایی داشت. فعالیت آنزیم پراکسیداز و میزان فنل کل در میوههای مایهزنی شده با مخمر بهطور معنیداری افزایش یافت.انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101SEROLOGICAL AND MOLECULAR DETECTION OF INSV and INTRODUCTION OF SOME INSV ORNAMENTAL HOST PLANTS FROM FIVE PROVINCES IN IRANتشخیص سرولوژیکی و مولکولی ویروس لکه بافت مرده گل حنا (INSV) و معرفی برخی گیاهان زینتی میزبان ویروس از 5 استان کشور13013115380FAJournal Article20151206<em>Impatiens necrotic spot virus</em> (INSV) infects ornamental plants worldwide. It has been reported from almost every ornamental screenhouse in Tehran province. INSV symptoms include necrotic leaf spot, chlorosis and stunting. Heavy losses have been reported from INSV in plants such as <em>Zinnia elegans</em>, <em>Ficus benjamina</em>, <em>Viola</em> spp., <em>Saintpaulia ioantha</em>, <em>Althea </em>spp., <em>Cheiranthus cheiri</em>, <em>Pelargonium</em>X<em>hortorum</em>, <em>Dahlia</em> spp. and <em>Gazania</em> spp., reducing quality and quantity of infected plants. In this research a total number of 581 ornamental samples of 58 different plant species with symptoms similar to those of INSV infection were collected in Lahijan, Tonkabone, Mahallat, Varamin and Dezful. The results indicated an average of 20.13% virus incidence in the collected samples in 4 provinces. INSV infection was recorded to be 28% in Mahallat, 24.5% in Tehran, 22.1% in Mazandaran and 16.4% in Guilan. No record of INSV infection was obtained from Khuzistan (Dezful) ornamental samples. Of the total of 58 ornamental species tested 33 species were recorded positive for INSV. Most ELISA positive samples were rechecked by RT-PCR using a set of specific primers directed to the N-gene and designed to amplify 777 bp product as shown by agarose gel electrophoresis. The results of serological and molecular tests showed infection of the following plants: <em>Alestreomeria </em>spp. (Markazi), <em>Erica </em>spp. (Mazandaran and Guilan), <em>Spathiphylum</em> spp. (Mazandaran and Guilan), <em>Zinnia elegans</em> (Tehran), <em>Anthurium </em>spp.(Guilan and Mazandaran), <em>Ficus benjamina </em>(Markazi and Mazandaran), <em>Viola</em> spp. (Tehran), <em>Saintpaulia ioantha</em> (Markazi and Tehran), <em>Scindapsus aureus </em>(Guilan), <em>Pilea cadieri </em>(Markazi), <em>Zingiber</em> spp. (Mazandaran), <em>Impatiens</em> spp. (Tehran and Mazandaran), <em>Althea </em>spp. (Mazandaran, Guilan and Markazi), <em>Chrysanthemum</em> spp. (Guilan and Mazandaran), <em>Dracaena fragrance </em>(Guilan), <em>Diffenbachia amoena</em> (Mazandaran), <em>Rosa</em> spp. (Mazandaran, Guilan, Markazi and Tehran), <em>Salvia splendens </em>(Mazandaran and Markazi), <em>Cycas</em> spp. (Mazandaran), <em>Cissus</em> spp. (Mazandaran), <em>Syngonium podophyllum </em>(Mazandaran), <em>Cheiranthus cheiri </em>(Markazi), <em>Pelargonium</em>×<em>hortorum </em>(Tehran and Markazi), <em>Ficus elastica </em>(Markazi), <em>Philodendron </em>spp. (Markazi and Mazandaran), <em>Bougainvillea</em> spp. (Tehran), <em>Codiaeum variegtum</em> (Tehran), <em>Dahlia</em> spp. (Markazi and Tehran), <em>Gazania</em> spp. (Markazi and Tehran), <em>Gladiolus</em> spp. (Tehran), <em>Zinnia elegans</em> (Markazi and Tehran),<em>Dianthus</em> spp. (Markazi and Tehran) and <em>Calendula </em>spp. (Markazi and Tehran) are as INSV ornamental hosts from Iran. Because of difficulties with direct RNA extraction from leaf tissues, <em>Ficus benjamina</em>, <em>Saintpaulia ioantha, Gladiolus</em> spp., <em>Cycas</em> spp., <em>Cissus</em> spp., <em>Ficus elastica</em>, <em>Rosa</em> spp., <em>Bougainvillea</em> spp. and <em>Dianthus</em> spp. were not rechecked by RT-PCR in this study.ویروس لکه بافت مرده گل حنا(INSV) <em>Impatiens necrotic spot virus</em> از مهمترین توسپویروسهای جدا شده از گیاهان زینتی در دنیا و ایران میباشد که تاکنون در اغلب گلخانههای پرورش گیاهان زینتی در استانهای تهران و مرکزی علائم ناشی از آلودگی به آن بهصورت لکههای نکروزة برگی، کلروز و کوتولگی دیده شده است. این ویروس با توجه به خسارت وارده روی میزبانهای زینتی کشور و کاهش کیفیت و کمیت در گیاهان آلوده و در مواردی مرگ کامل گیاه میزبان از اهمیت ویژهای برخوردار است. برای تعیین میزان آلودگی گیاهان زینتی به این ویروس در کشور، طی سالهای 90-1389 تعداد 581 نمونه برگی از 58 گونة زینتی مختلف با نشانههای لکههای نکروزة برگی، کلروز و کوتولگی شبیه به آلودگی به INSV از مناطق عمدة کشت و پرورش گیاهان زینتی در 5 استان کشور (گیلان 128 نمونه، مازندران 159 نمونه، تهران 122 نمونه، مرکزی 108 نمونه، دزفول 64 نمونه) جمعآوری و توسط آزمون سرولوژیکی الایزا (DAS-ELISA) از نظر آلودگی به ویروس لکه بافت مرده گل حنا INSV مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج به دست آمده نشانگر آلودگی 13/20 درصد نمونههای جمعآوری شده به ویروس لکه بافت مرده گل حنا و انتشار آلودگی در 4 استان از مناطق مورد بررسی بود. بیشترین آلودگی به ترتیب مربوط به استانهای مرکزی با 7/28% آلودگی، تهران 5/24% آلودگی، مازندران 01/22% و گیلان 4/16% آلودگی بود و هیچ یک از نمونههای مورد بررسی مربوط به استان خوزستان به ویروس INSV آلوده نبودند. طبق بررسیهای انجام شده در این تحقیق از 58 گونه زینتی مورد بررسی 33 گونه (89/56 %) به ویروس INSV آلودگی نشان دادند.تعدادی از گونههای دارای واکنش مثبت به ویروس INSV در سنجش الایزا، با آزمون زنجیرهای پلیمراز ( RT-PCR ) با بهکارگیری جفت پرایمرهای اختصاصی و طراحی شده برای قسمت نوکلئوکپسید (N-gene) باعث تکثیر قطعه مورد انتظار آن ناحیه و تشکیل باند bp777 در ژل آگاروز گردید. بر این اساس گیاهان آلسترومریا (مرکزی)، اریکا (مازندران و گیلان)، اسپات (مازندران و گیلان)، آهار (تهران)، آنتوریوم (گیلان و مازندران)، بنجامین (مرکزی و مازندران)، بنفشه (تهران)، بنفشه افریقایی (مرکزی و تهران)، پتوس (گیلان)، پیله آ (مرکزی)، جین جر (مازندران)، حنا (تهران و مازندران)، ختمی (مازندران، گیلان و مرکزی)، داودی (گیلان و مازندران)، دراسنا (گیلان)، دیفن باخیا (مازندران)، ﹸرز (مازندران، گیلان، مرکزی و تهران)، سلوی (مازندران و مرکزی)، سیکاس (مازندران)، سیسوس (مازندران)، سینگونیوم ابلق (مازندران)، شب بو (مرکزی)، شمعدانی (تهران و مرکزی)، فیکوس (مرکزی)، فیلودندرون (مرکزی و مازندران)، کاغذی (تهران)، کوروتن (تهران)، کوکب (مرکزی و تهران)، گازانیا (مرکزی و تهران)، گلایول (تهران)، مارگریت (مرکزی)، میخک (مرکزی و تهران) و همیشه بهار (مرکزی و تهران) به عنوان گیاه میزبان ویروس INSV معرفی میگردند. از میان 33 گونه فوقالذکر بنجامین، بنفشه افریقایی، گلایول، سیسوس، سیکاس، فیکوس، ﹸرز، کاغذی و میخک بهدلیل مشکلات استخراج مستقیم RNA از بافت برگی آنها با آزمون زنجیرهای پلیمراز ( RT-PCR ) در این تحقیق بررسی نشدند. <br clear="all" /> انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101FIRST REPORT OF Phomopsis amygdali (DEL.) TUSET & PORTILLA CAUSING GALLS ON COMMON HAZEL (Corylus avellana) TWIGS IN IRANاولین گزارش Phomopsis amygdali عامل شانکر درختان فندق در ایران13213315381FAمنصوره میرابوالفتحینویسندهلاله حسینیاننویسندهعبدالله میرحسینی مقدمنویسندهJournal Article20151206 The common hazel (<em>Corylus avellana</em>) is a species native to the northwest of Iran, with over 12500 ha grown in the province of Guilan. In the autumn of 2011, twigs and branch galls of <em>Corylus avellana</em> were frequently observed on common hazel trees in Eshkevarat orchards in the province of Guilan. On hazel trees the galls appear as large nodules initiated on twigs in which tissues developed more widely than normal twigs. The galls varied in size from 2-4 cm (Fig1). When cut open it consists of woody tissue that was disorganized in comparison to the normal wood. At first bacterial diagnostic assays were done on infected samples to find the probable bacterial agent, after getting negative results, the galls tissues were surface-sterilized in 1% NaOCl for 1 min before drying under a laminar flow hood. Small pieces of internal tissue were plated onto 2% potato dextrose agar (PDA) and malt extract agar; the PDA plates were incubated at 25°C in the dark to promote mycelium growth. Single conidial isolations were made onto fresh PDA plates from sporulating colonies. In order to induce sporulation, isolates were cultured on PDA plates and were incubated at 25°C under near ultraviolet (nuv) light in a 12 h light - darkness regime for 2-3 weeks. To determine the optimum temperatures for growth, radial mycelium growth was measured for isolates plated onto PDA and incubated for 5 days at seven different temperatures ranging from 5-35 ºC in 5 ºC intervals. Culture colours of isolates were described after seven days incubation at 25 ºC. A representative isolate was deposited at the CBS-KNAW Fungal Biodiversity Centre, the Netherlands, The CBS accession number assigned to the strain is CBS 134017. For molecular identification, DNA sequence data were generated for the ITS1-5.8S-ITS2 region (ITS) of the rDNA, and a fragment of the translation elongation factor 1-alpha (TEF) gene region (Van Niekerk <em>et al. </em>2005). These sequences were compared to other sequences of <em>P. amygdali</em> in GenBank, which confirmed the morphological observations. Sequences were submitted to GenBank under the accession numbers KC609755 for ITS, and KC609756 for TEF. Pathogenicity tests were conducted using two representative isolates of <em>P. amygdali</em> isolated from infected <em>Corylus avellana</em> twigs, both in the greenhouse and laboratory on 6-month-old common hazel plants and detached hazel twigs respectively. In the laboratory, common hazel detached twigs, 20-25 cm in length provided from a hazel orchard in spring, were wounded, and 5-mm mycelial plugs from the edge of 7-day-old colonies on PDA were placed under the bark of twig wounds and sealed with Parafilm with 10 replicates. Ten control detached twigs were inoculated with uncolonized PDA plugs. All twigs were incubated at 24 to 26°C for 15 days in the dark. Greenhouse pathogenicity tests were conducted with 15 replicates using 6-months-old hazel plants inoculated with the same method as was used for the detached twigs; uncolonized PDA plugs were used for the ten control plants. The inoculated and control plants were kept in a greenhouse for nine months at 20±5°C. Culture characteristics on PDA at 25°C was cottony with white to dark mycelium with inverse dark brownish, the margin of the colony was deeply lobbed and zonate, the isolates grew best at 25°C (colony diameter 45-48 mm after 5 days) on PDA. The isolates produced conidiomata in culture and dark-pigmented pycnidia were produced over the surface of potato dextrose agar (Fig 2). Conidiomata were eustromatic, superficial, scattered, black, and somewhat spherical to irregular, uniloculate formed on PDA had a conidiomatal wall including several cells thick with the outer layers brown to black, ostiole was single, circular to irregular in shape, and some uniloculate conidiomata had a rostrate beak. Conidiophores were short with 1 or 2 septa or multiseptate and branched. Conidia were of two types, alpha conidia were hyaline, fusiform, and straight, guttulate, aseptate and the mean of conidial dimensions were 6.9 × 2.8 µm, beta conidia were hyaline, filiform, straight or curved, eguttulate, aseptate.The ITS sequence results indicated that the sequenced strain (Gen Bank KC609755) differed with 3 nucleotides and 1 gap from <em>Phomopsis amygdali</em> [GenBank AY485752, strain STE-U 5151(Van Niekerk <em>et al. </em>2005)] and numerous other strains of this species available on GenBank. The fragment of the translation elongation factor 1-alpha (TEF) gene region was identical to<em> Phomopsis amygdali</em> [(Gen Bank GQ250339 (Santes <em>et al. </em>2010)].Pathogenicity was proved when the brown-black lesions developed and the same fungus was reisolated from all inoculated twigs in the laboratory. Young inoculated plants were decayed after two months and new shoots were grown from their feet. On vigorous infected plants the gall symptoms developed on the inoculation site of the stem after growing nine months.To our knowledge, this is the first report of the occurrence of <em>P. amygdali</em> causing galls on hazel trees in Iran. <em>Phomopsis amygdali</em> (Delacr.) is a known pathogen of peach in the world (Farr <em>et al. </em>1999) and one of the most virulence <em>Phomopsis</em> species as the causal agents of cane, leaf spot and Phomopsis swollen arm on grapevine. Phomopsis galls of trees and shrub are caused by one or more species of Phomopsis and were found also on oak, maple and elm. The species was recently epitypified as part of a report on a disease survey on almond in Portugal (Diogo <em>et al. </em>2010). The disease cycle on hazel trees has not been studied yet.درخت فندق(<em>Corylus avellana</em>) بومی شمال غرب ایران بوده و بالع بر 12500 هکتار باغ را در استان گیلان پوشش می دهد. در سال 1389 گالهایی با اندازههایی حدود 2-4 سانتیمتر روی شاخههای درختان فندق منطفه اشکورات استان گیلان مشاهده و نمونهبرداری شد. در ابتدا برای تشخیص احتمالی باکتری عامل بیماری مطالعات باکتریولوژی در آزمایشگاه باکتریولوژی موسسه تحقیقات گیاهپزشکی انجام شد، پس از اطمینان از عدم وجود عامل باکتریایی، مطالعات قارچشناسی جهت سبب شناسی بیماری آغاز شد. قطعاتی از بخشهای داخلی گال با استفاده از روشهای متعارف ضد عفونی سطحی و در محیط PDA و MA کشت شد، در اکثر موارد جدایهای از یک قارچ پیکنیدیوم دار جداشد، پس از خالصسازی، جهت اسپورزایی جدایهها در دمای ºC25 و تحت 12 ساعت نور نزدیک فرا بنفش (nuv) و 12 ساعت تاریکی نگهداری شدند. به منظور تعیین دمای بهینه رشد جدایه ها در محیط PDA و در دامنه دمایی ºC5-35 به فاصله دمایی ºC 5 قرار داده شدند و مطالعات مرفولوژیک جهت تعیین گونه انجام شد (santos <em>et al.</em> 2010). جدایهای از قارچ با شماره 134017 در موسسه CBS هلند و شماره های KC609755 , GenBank KC609756 GenBank در بانک ژن نگاهداری شد. برای بررسی مولکولی نواحی ITS وTEF جدایه اخیر تعیین توالی و با توالیهای نوکلئوتیدی دیگر تاکسون های موجود در NCBIمقایسه شد. بیماریزایی جدایه ای از قارچ با دو روش در آزمایشگاه و گلخانه با قرار دادن قطعهای به ابعاد 5×5 میلیمتر از محیط کشت حامل میسلیوم قارج در زیر پوست 20 شاخه بریده شده فندق در فصل بهار با منظور نمودن شاهد حامل محیط و فاقد میسلیوم و در گلخانه با روش مایهزنی فوق روی نهالهای شش ماهه فندق انجام شد. نشانههای بیماری به صورت تغییررنگ نسوج به قهوهای متمایل به سیاه و توسعه آن (3-4سانتیمتر) پس از 20 روز در محل مایهزنی شاخههای بریده در آزمایشگاه، و در گلخانه به صورت زردی، ضعف و زوال نهالهای مایه زنی شده توام با ریزش برگها پس از دو ماه و ظهور جوانه های جدید از زیر محل مایهزنی شده و تولید گال در محل مایه زنی در نهالهای قویتر پس از نه ماه دیده شد. با کشت مجدد از 4-5 سانتیمتری محل مایه زنی عامل بیماری مجددا جداسازی شد. براساس مطالعات مرفولوژی و تعیین توالی نواحی ITSو TEF و مقایسه آن به ترتیب با جدایه های GenBank AY485752, strain STE-U 5151(Farr <em>et al.</em> 1999) و Gen Bank GQ250339 (Van niekerk <em>et al.</em> 2005)) موجود در بانک ژن، قارچ عامل بیماری <em>Phomopsis amygdali</em> (Delacr.) تشخیص شد. براساس منابع موجود این اولین گزارش این قارچ از درختان فندق مبتلا به گال از ایران است و تا کنون از روی درختان فندق در سایر مناطق دنیا نیز گزارش نگردیده است.انجمن بیماری شناسی گیاهی ایرانبیماریهای گیاهی0006-277449120131101FIRST REPORT of DIPLODIA SERIATA FROM ZELKOVA CARPINIFOLIA WITH CANKER SYMPTOMS IN IRANاولین گزارش Diplodia seriata از درختان آزاد مبتلا به شانکر در ایران13413515384FAJournal Article20151206<em>Zelkova carpinifolia</em> is native to the Alborz mountains in Iran. It is a deciduous tree growing 20-35 m tall, with a trunk of up to 2 m in diameter. During the winter of 2011 cankers and dieback of branches were most commonly seen on zelkova trees in the Daland forest in Golestsn province. Cankers were enlarged and severely led to decline in March. Distinctive symptoms, assumed to be caused by a fungal infection, were observed in bark tissue of infected stems and branches trees.
Cankered twigs, branches and stem were noticeable when dieback occurred. When the bark was removed, the wood beneath the bark was discolored brown to reddish-brown instead of white. In some cases cankers appeared sunken and darkened and in some cases were surrounded and contained by callus wound wood, particularly on larger branches and trunks. The bark of the canker’s area was peeled and dropped. To isolate the causal agent, surface-sterilized wood pieces of the infected tissue were plated on potato dextrose agar (PDA), and malt extract agar (MA). Hyphal tip isolates were obtained from these colonies. Isolates were cultured on half strength PDA and incubated at 25°C for determination of cultural characters. Pycnidial formation was stimulated by growing the isolates on 2% water agar that included pieces of autoclaved zelkova twigs and incubated at 25ºC under daylightcondition.
A representative isolate was deposited at the CBS-KNAW Fungal Biodiversity Centre, The CBS accession number assigned to the strain is CBS 134016.
For molecular identification, this isolate was subjected to amplification and sequencing of the internal transcribed spacer (ITS) regions of the nrRNA gene operon.
Pathogenicity tests were performed by inoculation of 2-year-old zelkova plants; two isolates were used and for every isolate four plants were wounded and mycelium plugs from actively-growing cultures on PDA were placed on the wounds and sealed with Para film. Two control plants were inoculated with sterile PDA plugs.
Fungal colonies on PDA were dark olive to black after 7-10 d. Pycnidia were globose, solitary, stromatic, up to 450µm diam. Conidiogenous cells were hyaline, thin-walled, smooth, cylindrical, producing a single conidium at the tip. Conidia were ovoid with truncated or rounded base and obtuse apex which were initially hyaline but became brown before they were released from the pycnidia and remained aseptate. On the basis of these morphological characters, the fungal species was identified as <em>Diplodia seriata</em>de Not. (Phillips <em>et al.</em> 2007).
The sexual morph <em>Botryosphaeria</em> <em>obtusa</em> (Schwein.) Shoemaker, was produced on the edge of the zelkova canker embedded within the cortical tissue, solitary, dark brown to black. Asci were clavate interspersed amongst filiform paraphyses, 8-spored, bitunicate. Ascospores were hyaline, unicellular, fusoid, wider around the mid region.
The ITS sequence results indicated that the sequence generated in this study (GenBank KC461297) was identical over 569 nucleotides to <em>Diplodia seriata</em> (GenBank JQ659282, strain UCR1653) and over 574 nucleotides to <em>Botryosphaeria obtuse</em>, (Schwein.) Shoemaker (GenBank HQ629955, strain SDZ-02).
After 2 months past inoculation, brown necrosis was observed under the bark and <em>D. seriata</em> was constantly reisolated from the inoculated plants and thus fulfilled Koch's postulates and confirmed the pathogenicity of <em>D. seriata</em> on zelkova as causal agent of zelkova cankers. Control plants showed no symptoms of the disease.
<em>D. seriata</em> is an important pathogen has been recognized as the cause of branch and stem canker of several trees and shrubs (Phillips <em>et al</em>. 2007), also on at least 34 different hosts (Punithalingam and Walker 1973).To my knowledge; this is the first report of <em>Botryosphaeria</em> <em>obtusa</em> (Schwein.) Shoemaker,(<em>D. seriata</em>), as causal agent of <em>Zelkova carpinifolia </em>
canker in Iran. The disease could represent a serious threat for old zelkova trees throughout Alborz mountain forests. <em>Botryosphaeria</em> fungi are not host-specific but can cause disease on many plant species. The causal agent can thus be regarded as a cosmopolitan, plurivorous fungus and can colonize plant tissue through wounds, growth cracks, leaf scars, and lenticels. Many environmental stress factors, such as heat, drought, freeze injury, and compacted soil, can predispose trees and shrubs to infection and colonization by this agent.
Acknowledgementsدرخت آزاد بومی رشته کوه البزز در ایران است. این درخت در حدود 20- 30 متر ارتفاع و قطر تنهای حدود دو متر دارد. در سال 1390 بیماری خشکیدگی شاخههای درختان آزاد با علائم شانکر به طور وسیع در جنگل دلند استان گلستان دیده شد. در فروردین ماه درختان دارای شانکرهای بزرگ رو به زوال بودند، در این شرایط وجود شانکرهای روی شاخه ها و تنه قابل توجه بود. قبل از جدا شدن پوست در محل شانکر پوست تنه نسبت به قسمتهای سالم پوست فرورفته و تیره بود، همچنین در مواردی حاشیه شانکر کالوس تشکیل شده بود، (شکل1A). نسوج آلوده با استفاده از روشهای متعارف بیماریشناسی گیاهی روی محیط های کشت مصنوعی مناسب کشت و جدایه های قارچی خالص شد. برای تولید پیکنیدیوم قطعات نسج چوب درخت آزاد به محیط آگار 2% نیز افزوده شد. جدایهای از قارچ با شماره 134016 در موسسه CBS هلند و شماره (GenBank KC461297) در بانک ژن نگهداری شد. برای بررسی مولکولی ناحیه ITSجدایه اخیر تعیین توالی و با توالیهای نوکلئوتیدی دیگر تاکسونهای موجود در NCBIمقایسه شد. بیماریزایی جدایهای از قارچ نیز روی نهالهای دو ساله آزاد در گلخانه انجام و با تغییررنگ ناحیه مایهزنی شده، توسعه زخم و تغییررنگ نسوج و جداسازی مجدد عامل از نسوج آلوده به اثبات رسید. براساس مطالعات مرفولوژی و تعیین توالی ناحیه ITSقارچ عامل بیماری <em>Diplodia seriata</em> de Not تعیین شد. پریتسیومهای قارچ که در لبههای شانکر تشکیل شده بودند از نظر مرفولوژی بررسی و <em>Botryosphaeria obtusa</em> (Schwein.) Shoemaker تشخیص گردید (شکل1C). براساس منابع موجود این اولین گزارش این قارچ از درختان مبتلا به شانکر از درختان آزاد ایران است و تا کنون از روی درختان آزاد در سایر مناطق دنیا نیز گزارش نشده است.